0 조회수 • 3:37 분 • July 8th, 2025
전기생리학 설정의 기록 챔버에서 인공 뇌척수액(aCSF)에 고정된 전두엽 피질 뇌 절편으로 시작합니다.
이 aCSF에는 뉴런의 나트륨 채널을 억제하는 나트륨 이온 채널 차단제가 포함되어 있습니다.
감마-아미노부티르산(GABA)으로 채워진 퍼프 마이크로피펫을 시냅스 후 뉴런 위에 놓습니다.
동일한 뉴런 근처에 전극이 있는 이온 용액으로 채워진 기록 마이크로피펫을 놓습니다.
약한 흡입을 가하여 신경막의 작은 패치로 단단히 밀봉합니다.
그런 다음 강한 흡입력을 가하여 패치된 막을 파괴하여 뉴런 내부에 접근할 수 있도록 합니다.
시냅스 후 뉴런에서 리간드 개폐 염화물 채널과 결합하는 억제성 신경 전달 물질인 GABA를 전달합니다.
이것은 채널을 열고 염화물 이온 이 뉴런에 들어갈 수 있도록 하여 억제성 시냅스 후 전류를 생성합니다.
일정한 전압에서 시냅스 후 전류를 기록합니다. 억제성 시냅스 후 전류의 증가는 신경 활동 억제에서 GABA의 역할을 반영합니다.
슬라이스의 크기에 맞게 팁이 미세하게 절단된 파스퇴르 피펫을 사용하여 뇌 슬라이스를 기록 챔버로 옮깁니다. 그런 다음 슬라이스 위에 플래티넘 슬라이스 앵커를 놓아 플랫폼에 고정합니다. 그 후, 기록 마이크로피펫에 내부 용액을 채우고, 퍼프 마이크로피펫에 10마이크로몰, 50마이크로몰, 100마이크로몰 또는 aCSF의 GABA를 비히클 대조군으로 채웁니다.
이물질로 막히는 것을 방지하려면 기록 전극을 aCSF에 담그기 전에 1밀리리터 주사기를 사용하여 약간의 양압을 가하십시오. 현미경으로 기록 전극과 퍼프 마이크로피펫을 배치하여 팁이 모니터 중앙에 나타나도록 합니다. 그런 다음 대상 뉴런을 식별합니다. 퍼프 마이크로피펫을 서서히 내리면서 현미경 초점을 조정하고 기록 뉴런 위에 45도 각도로 놓습니다.
퍼프 마이크로피펫의 끝과 표적 뉴런 사이의 거리를 20-40마이크로미터 범위로 유지하십시오. 천천히 조심스럽게 기록 전극으로 뉴런에 접근한 다음 양압을 해제합니다. 전극 홀더에 연결된 튜브를 통해 약하고 짧은 흡입을 가하여 기가옴 밀봉을 만듭니다. 전압을 0밀리볼트로 유지하십시오.
기가옴 씰이 형성된 후 수동 또는 자동으로 빠르고 느린 정전 용량을 보상합니다. 그런 다음 튜브를 통해 짧고 강한 흡입을 가하여 전체 셀 모드로 전환합니다. 그런 다음 전압 클램프 모드에서 유발된 IPSC 전류를 기록합니다.
마스터 8전압 스텝 발생기로 제어되는 퍼프 마이크로피펫을 통해 단일 또는 쌍의 GABA 퍼프를 전달합니다. 퍼프 지속 시간을 변경하여 최상의 유발 IPSC 전류 결과를 얻고 유발된 IPSC 전류를 측정합니다.