0 조회수 • 4:21 분 • July 8th, 2025
폴리머 코팅된 다중 전극 어레이 또는 MEA를 사용하여 공동 배양된 배아 척수 절편을 두 개의 별도 영역에 배치하여 두 절편에서 동시에 기록할 수 있습니다.
슬라이스는 이전에 병변이 있는 영역에서 재생된 신경 연결을 보여줍니다.
신경 생존을 유지하기 위해 이온과 영양분이 풍부한 세포외 용액이 포함된 기록 챔버에 MEA를 배치합니다.
시스템이 안정화되어 뉴런 적응과 의사소통이 촉진됩니다.
뉴런은 MEA의 근처 전극에 의해 기록되는 활동 전위라고 하는 전기 신호를 통해 통신합니다.
각 전극의 개별 신호가 결합되어 각 슬라이스에서 전기 신호가 생성됩니다.
뉴런 안정성을 유지하기 위해 정기적으로 세포외 용액을 교체하십시오.
신경막의 억제성 신경전달물질 수용체를 차단하는 억제제가 포함된 세포외 용액을 추가하여 뉴런을 더 오랜 기간 동안 활성 상태로 유지합니다.
두 슬라이스의 전기적 활동을 비교합니다. 두 슬라이스 사이의 동기화된 전기 신호는 시냅스 연결과 성공적인 신경 재생을 확인합니다.
코팅된 미세전극 어레이가 있는 페트리 접시를 입체 현미경 아래에 넣습니다. 어레이에 초점을 맞추고 6마이크로리터의 닭 플라즈마 방울을 전극 어레이의 중앙에 놓습니다. 작은 주걱을 사용하여 복부면이 서로 마주보도록 두 개의 척수 절편을 혈장 방울에 조심스럽게 밀어 넣습니다.
다음으로, 닭 혈장 방울 주위에 8마이크로리터의 트롬빈을 추가합니다. 그런 다음 피펫 팁을 사용하여 닭 혈장과 트롬빈 혼합물을 조심스럽게 혼합하고 펴 바릅니다. 닭고기 혈장과 트롬빈 혼합물이 너무 끈적해져서 응고되기 시작하기 직전에 여분의 액체를 흡인하십시오. 그런 다음 페트리 접시에 뚜껑을 덮고 가습실에 넣습니다.
챔버를 섭씨 37도의 인큐베이터 안에 약 한 시간 동안 두십시오. 배양 후 샘플에 10마이크로리터의 영양 배지를 조심스럽게 첨가합니다. 페트리 접시에 뚜껑을 덮고 인큐베이터에 다시 45분 동안 넣습니다. 다음으로, 각 다중 전극 어레이 배양 어셈블리를 롤러 튜브에 넣고 3밀리리터의 영양 배지를 추가합니다. 뚜껑을 단단히 닫고 롤러 튜브를 롤러 드럼에 넣습니다. 인큐베이터에서 1-2RPM으로 드럼을 섭씨 37도에서
회전시킵니다.멸균 고무 끝 겸자를 사용하여 롤러 튜브에서 다중 전극 어레이 배양 어셈블리를 제거하고 입체 현미경 아래에서 페트리 접시에 넣습니다. 조직에 초점을 맞추고 두 조각이 융합되었는지 확인합니다. 그런 다음 어셈블리를 안정적으로 잡고 조직 조각에 가까운 다중 전극 어레이의 홈에 메스 칼날을 놓습니다. 메스를 다소 수평으로 잡은 다음 메스 손잡이를 들어 올리되 칼날이 바닥에서 끝으로 굴러가 조직을 절단하고 홈을 덮도록 메스 칼날이 배열의 홈에 머물도록 합니다.
필요한 경우 25게이지 바늘 끝으로 잔여 조직 연결을 절단합니다. 홈 내 영역에서만 작업하고 부드러운 가장자리를 만지지 마십시오. 다중 전극 어레이 배양 어셈블리를 롤러 튜브에 다시 넣고 배양액에 3밀리리터의 신선한 영양 배지를 추가합니다. 그런 다음 롤러 튜브를 섭씨 37도의 인큐베이터에서 롤러 드럼에 다시 놓습니다.
다중 전극 어레이 배양 어셈블리를 기록 챔버에 장착하고 약 500마이크로리터의 세포외 용액을 어레이에 도포합니다. 그런 다음 어셈블리를 현미경에 장착합니다. 시스템이 안정화될 때까지 10분 동안 기다린 다음 각 활동 감지 전극의 기본 자발적 활동을 10분 동안 기록합니다. 녹음을 총 두 번 반복합니다.
안정적인 세포외 상태를 보장하려면 모든 기록 세션 후에 세포외 용액을 교환하십시오. 원하는 경우 1마이크로몰의 스트리키닌과 10마이크로몰의 가바진을 포함하는 세포외 용액을 적용하여 네트워크를 억제하지 않고 전기적 활동을 기록하기 전에 최소 2분 동안 기다립니다.