Whole-Cell Patch Clamp를 사용한 형광 뉴런의 흥분성 연구

0 조회수3:06 • July 8th, 2025

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aCSF로 관류된 기록 챔버에서 고정된 형질감염된 마우스 관상 절편을 취합니다.

슬라이스에는 표적 효소와 형광 단백질을 발현하는 희박한 피라미드 뉴런 집단이 포함되어 있습니다.

세포내 용액과 신경 신호 측정을 위한 증폭기에 연결된 전극으로 구성된 기록 피펫을 조립합니다.

표적 조직 영역을 현미경으로 식별하고 형광 뉴런을 찾습니다.

피펫에 양압을 가하여 막힘을 방지하고 표적 뉴런으로 전진시킵니다.

양압은 접촉 시 신경막에 약간의 움푹 들어간 곳을 일으킵니다.

압력을 풀어 멤브레인과 팁 사이에 단단히 밀봉됩니다.

뉴런을 안정화하기 위해 유지 전위를 일정한 음의 값으로 설정합니다.

짧은 음압을 가하여 멤브레인을 파열시켜 세포질을 피펫 내부에 연결하고 전체 세포 구성을 설정합니다.

전류 클램프 모드로 전환하고 양의 전류 펄스를 적용하여 신경 흥분성을 나타내는 활동 전위를 생성합니다.

파스퇴르 피펫이나 작은 브러시를 사용하여 슬라이스를 기록 챔버로 옮깁니다. 하프로 슬라이스를 누르고 분당 2밀리리터의 속도로 ACSF를 관류합니다. GFP 양성 뉴런을 패치하려면 현미경을 통해 관심 영역을 10배로 찾습니다. 그런 다음 60x 대물렌즈를 사용하여 GFP 양성 세포를 찾습니다.

다음으로, 기록 전극에 세포내 용액을 채웁니다. 그런 다음 유리 피펫을 피펫 홀더에 넣습니다. 그런 다음 피펫 팁을 수조에 넣고 팁에 초점을 맞춥니다. 피펫이 수조에 들어가면 배압 제어 시스템을 통해 양압을 가합니다.

피펫의 배압을 유지하면서 시각적 안내 하에 관심 세포에 접근합니다. 세포 표면에 작은 보조개가 나타나면 압력을 해제하십시오. 이 시점에서 1기가옴보다 큰 저항을 가진 단단한 밀봉이 형성될 수 있습니다. 그렇지 않으면 가벼운 음압을 가하여 용이하게 하십시오.

씰이 형성되는 동안 유지 전압 클램프를 음의 60밀리볼트로 가져옵니다. 기가옴 밀봉이 형성되면 흡입 펄스를 가하여 세포막을 파열시키고 전체 세포 모드로 전환합니다. 전체 셀 모드가 되면 전압 클램프에서 전류 클램프 모드로 전환하고 기록을 시작합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026