Brain Slices의 전기생리학적 기록을 위한 전체 셀 전압 클램프 구성 설정

JoVE Encyclopedia of Experiments

신경과학

0 조회수 • 2:42 분 • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

전해질 용액에 와이어 전극이 있는 기록 피펫을 가져갑니다.

고정

된 뇌 절편 위에 피펫을 놓습니다.

피펫 전류를 조정하여 배경 신호를 줄입니다.

현미경을 사용하여 표적 뉴런을 찾고 피펫을 뉴런 쪽으로 이동합니다.

약간의 양압을 가하고 잠급니다.

양압은 조직 표면을 교란하여 세포에 근접했음을 나타냅니다.

멤브레인에 보조개가 형성되어 올바른 위치를 나타낼 때까지 피펫을 더 가까이 가져옵니다.

양압을 해제하십시오.

세포가 피펫과 밀봉을 형성할 때 저항이 증가하는 것을 관찰하십시오.

안정성을 위해 멤브레인 전위를 일정한 음의 전압으로 유지하십시오.

과도한 압력을 제거하기 위해 마이크로피펫을 당겨 빼냅니다.

정확성을 위해 피펫의 빠른 전기 응답과 느린 전기 응답을 조정하십시오.

짧은 흡입을 가하여 셀을 뚫고 직접 전기 연결을 설정합니다.

이제 전체 셀 전압 클램프 구성이 전기생리학 기록을 위한 준비가 되었습니다.

전체 셀 구성을 얻으려면 기록 피펫을 슬라이스 바로 위에 놓고 전압 클램프 모드에서 피펫 전류를 오프셋합니다. 피펫에 약간의 양압을 가하고 마개를 잠급니다.

다음으로, 막이 온전한 건강한 세포를 선택하고 피펫으로 조직에 접근합니다. 양압은 조직에 약간의 교란을 일으켜야 합니다. 세포 표면에 작은 보조개가 형성될 때까지 대각선 동작으로 피펫을 세포에 천천히 더 가깝게 가져옵니다. 그런 다음 양압 잠금 장치를 해제합니다. 셀이 밀봉을 형성하기 시작하고 저항이 1기가옴 이상으로 증가합니다. 전압 클램프에서 셀을 -68밀리볼트로 유지합니다.

그런 다음 피펫을 셀에서 대각선으로 살짝 당겨 과도한 압력을 제거합니다. 빠르고 느린 피펫 정전 용량을 보상합니다. 피펫 홀더에 연결된 튜브를 통해 짧은 흡입을 가하여 세포를 뚫고 전체 세포 구성을 얻습니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026