0 조회수 • 4:00 분 • July 8th, 2025
초파리 파리를 머리를 노출한 홀더에 장착합니다.
한쪽 눈에 구멍을 만들고 각막을 제거하여 망막을 노출시킵니다.
홀더를 녹음 플랫폼에 놓습니다.
생리 식염수가 들어 있는 무딘 기준 전극을 헤드 캡슐에 삽입합니다.
다음으로, 세포내 환경 모방 용액이 들어 있는 날카로운 기록 전극을 개구부를 통해 망막에 삽입합니다.
눈이 어둡게 적응하도록 하십시오.
기록 전극의 저항을 측정하여 기록에 적합한지 확인하십시오.
그런 다음 기록 전극과 기준 전극 사이의 기준 전압 차이를 제거합니다.
암순응 동안 망막 광수용체 세포의 특정 이온 채널은 열린 상태로 유지되어 꾸준한 양이온 유입을 허용합니다.
섬광으로 눈을 자극하십시오.
이에 대한 반응으로 이온 채널이 닫혀 양이온 유입이 줄어들고 유출이 촉진됩니다.
결과적으로, 광수용체의 막 전위는 전압의 강하로 기록 전극에 의해 측정되는 더 음수가 됩니다.
미세 전극 ampliifier를 작동할 때 정전기를 방지하기 위해 항상 패러데이 케이지 또는 진동 방지 테이블의 금속 표면을 만져 접지하십시오. 장착된 플라이를 플라이 준비 플랫폼 폴에 고정합니다.
파리의 왼쪽 눈이 조사관을 똑바로 향하도록 플라이 홀더를 돌립니다. 다음으로, 작고 거친 미세 조작기를 사용하여 무딘 기준 전극을 파리의 ocelli를 통해 머리 캡슐에 부드럽게 삽입합니다. 파리가 여전히 건강해 보이고 더듬이를 움직이는지 확인하십시오. 녹음할 가치가 있는 준비는 훌륭해야 합니다.
이제 젤리로 코팅된 구멍을 통해 날카로운 기록 미세 전극을 왼쪽 눈으로 밀어 넣습니다. 조직에 들어갈 때 전극 팁 위치는 반사율 패턴으로 분명해야 합니다. 깨지기 쉬운 전극 팁은 완벽하게 안내되어야 하며 그렇지 않으면 파손되어 매우 어렵습니다.
기록되는 세포 유형에 따라 파리의 머리 방향은 약간 달라야 합니다. 전극이 제자리에 있는 상태에서 마이크로 전극 증폭기를 켭니다. 그런 다음 차가운 광원을 끄고 주전원에서 플러그를 뽑은 다음 중앙 접지에 연결하여 접지 루프로 인한 전기 노이즈를 최소화합니다.
다음으로, 카르단 암 시스템이 플라이 주위에서 자유롭게 움직일 수 있도록 구즈넥 라이트 가이드를 조정합니다. 그런 다음 실내 조명을 꺼서 파리 준비를 상대적으로 어둡게 하십시오. 이제 눈에 있는 기록 전극의 저항을 측정합니다. 100에서 250메가옴 사이여야 합니다.
그런 다음 증폭기를 전류 클램프 또는 브리지로 설정하고 전극 사이의 전압을 0으로 설정합니다. 플라이가 몇 분 동안 어둡게 적응된 후 피에조 스테퍼를 사용하거나 미세 해상도 손잡이를 부드럽게 회전시켜 0.1-1미크론 단위로 기록 전극 팁을 눈에 밀어 넣습니다.
각 단계에서 1-10밀리초 섬광으로 눈을 자극합니다. 빛이 깜박일 때마다 전압 또는 ERG가 잠시 강하합니다.