고정된 제브라피시 유충에서 구심성 뉴런의 전기 신호 모니터링

전기생리학 설정에서 세포외 용액으로 채워진 기록 챔버에서 고정되고 마비된 제브라피쉬 유충으로 시작합니다.

구심성 마이크로피펫에 신경 활동을 기록하기 위한 전기 전도성을 제공하는 이온이 포함된 세포외 용액을 채웁니다.

신호 기록을 위해 증폭기에 연결된 기록 전극이 포함된 마이크로 매니퓰레이터로 조립합니다.

피펫이 막히는 것을 방지하기 위해 양압을 가하십시오.

피펫 팁을 측면 신경을 따라 움직여 구심성 신경체 클러스터가 포함된 구심성 신경절에 인접하게 배치합니다.

이 뉴런의 세포 과정은 물의 움직임을 감지하는 측선을 따라 위치한 유모 세포에 연결됩니다.

그런 다음 부드러운 음압을 가하여 마이크로피펫과 구심성 신경절 사이에 느슨한 밀봉을 형성합니다.

고정된 유충의 유모 세포로부터 감각 입력을 받는 구심성 뉴런의 전기 신호를 기록합니다.

제브라피쉬 유충을 고정시키고 팁이 큰 이송 피펫을 사용하여 35mm 페트리 접시로 옮깁니다. 주변 용액을 최대한 제거하십시오. 유충을 10마이크로리터의 0.1% 알파 방가로톡신에 약 5분 동안 담급니다. 마비된 유충을 세포외 용액으로 10분 동안 씻습니다. 그런 다음 이송 피펫을 사용하여 유충을 세포외 용액 수조에서 실리콘 바닥이 있는 기록 접시로 옮깁니다.

실체 현미경 아래에서 끝이 가는 집게를 사용하여 유충을 실리콘 매트 중앙 위에 부드럽게 배치하고 측면이 위로 향하게 하고 신체의 앞쪽과 뒤쪽 끝이 왼쪽에서 오른쪽으로 이어집니다. 끝이 가는 집게를 사용하여 에칭된 핀을 유충의 등쪽 척삭을 통해 실리콘에 직교로 삽입하여 항문 바로 등쪽에 삽입합니다. 꼬리 끝 근처의 척삭을 통해 두 번째 핀을 삽입하고 세 번째 핀을 가스 방광의 척삭 등쪽을 통해 삽입합니다. 핀이 봉지재에 삽입될 때 약간의 회전을 제공하면서 이낭을 통해 네 번째 핀을 삽입합니다.

약간의 회전이 적용되면 cleithrum과 obtic vesicle 사이의 조직을 관찰하여 구심성 체세포 클러스터를 드러냅니다. 고정된 용암을 DIC 현미경의 고정 스테이지에 있는 10배 대물렌즈 아래에 놓고 근육 블록의 근중격 갈라진 틈을 왼쪽 헤드 스테이지 벡터와 평행하게 방향을 잡습니다.

접지선을 수조 용액에 넣고 왼쪽 헤드 스테이지에 연결되어 있는지 확인합니다. 구심성 기록 전극에 30마이크로리터의 세포외 용액을 채우고 오른쪽 헤드 스테이지 피펫 홀더에 삽입합니다. 그런 다음 공압 변환기에 의해 생성된 양압을 가하면서 접시 용액에 내립니다.

전극을 찾아 전극 팁을 시편 위로 가져옵니다. 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 구심성 전극 팁이 cleithrum 위의 위치를 유지할 때까지 내립니다. 배율을 40배 침수로 높이고 후외측선 신경과 cleithrum의 교차점을 찾습니다. 전극 팁을 구심성 신경절 위로 가져오고 팁이 상피에 닿을 때까지 피펫을 내립니다. 전체 팁 둘레가 구심성 신경절에 닿도록 전극을 부드럽게 조작합니다.