뇌 절편에서 pedunculopontine 핵 뉴런의 감마 대역 진동 기록

시냅스 차단제가 포함된 aCSF에 잠긴 시상 뇌 절편을 사용하여 전기생리학적 설정으로 시작합니다.

이 섹션에는 뉴런이 풍부한 PPN 영역이 포함되어 있습니다.

시냅스 차단제는 다양한 신경 흥분 및 억제 수용체와 막 나트륨 채널을 억제하여 간섭을 방지합니다.

패치 피펫에 칼륨이 풍부한 용액을 채우고 기록 전극과 증폭기에 연결된 홀더에 삽입합니다.

막힘을 방지하기 위해 피펫에 양압을 가한 다음 PPN 뉴런 근처에 배치합니다.

음흡입을 가하여 뉴런 막과 단단히 밀봉하고 막이 파손될 때까지 이 흡입을 계속합니다.

양의 전류 펄스를 전달하여 전압 의존성 칼슘 채널을 열어 칼슘 이온이 들어갈 수 있도록 합니다.

이것은 뉴런을 완전히 흥분시키지 않고 각성에 필수적인 낮은 수준의 흥분인 감마 대역 진동을 유도합니다.

감마 대역 진동을 모니터링하기 위해 기록 피펫을 통해 이러한 신호를 기록합니다.

이 절차에서는 슬라이스를 침수 챔버로 옮기고 그 위에 스크린을 놓아 슬라이스를 고정한 다음 선택된 수용체 길항제를 포함하는 산소화 aCSF로 분당 1.5밀리리터로 관류합니다.

고유 막 특성을 분리하기 위해 해야 할 일은 세포 주변의 빠른 시냅스 전달을 차단하고 활동 전위를 생성하는 능력도 차단하는 것입니다. 따라서 활동 전위를 차단하기 위해 시냅스 차단제와 테트로도톡신 또는 TTX를 사용해야 합니다. 그렇게 하면 패치하는 세포가 이러한 특성을 생성하는 세포이며, 시냅스 입력은 이를 담당하지 않으며, 이것이 바로 우리가 여기서 연구하고 있는 고유 막 특성입니다.

그런 다음 기록 패치 피펫에 세포내 고칼륨 용액을 채웁니다. 헤드에 피펫을 삽입합니다.tage 홀더. 그런 다음 피펫 홀더에 연결된 1밀리리터 주사기를 사용하여 작은 양압을 가합니다. 근적외선 미분 간섭 대비 광학과 함께 4x 대물렌즈를 사용하여 상소뇌 꽃자루의 등쪽에 있는 PPN 핵을 찾습니다.

천

천히 기계식 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 기록 피펫을 PPN 핵으로 내립니다. 그런 다음 꽃자루 뒤쪽 끝 바로 뒤쪽에 위치한 PPN pars compacta에 기록 피펫을 배치합니다. 40x 수침 렌즈를 사용하여 기록 피펫을 PPN 뉴런과 접촉시키고 빠르게 음의 흡입을 가하여 세포와 밀봉을 형성합니다.

전압 클램프 씰 소프트웨어를 사용하여 음흡입 중 피펫 저항을 모니터링합니다. 그런 다음 음압을 천천히 높입니다. 피펫의 저항 값이 80-100메가옴에 도달하면 유지 전위를 마이너스