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신경과학
0 조회수 • 3:10 분 • July 8th, 2025
뉴런 막에 통합되고 막 전위 변화에 반응하는 형광 분자인 전압 민감성 염료 또는 VSD로 염색된 고정된 마우스 뇌 절편을 가져 와서 보십시오.
슬라이스를 기록 챔버에 놓습니다.
기준선 전압 참조를 위해 접지 전극을 설치합니다.
그런 다음 슬라이스에 자극 및 기록 전극을 배치합니다.
전기 펄스를 적용합니다.
펄스는 뉴런을 자극하여 전압 개폐 나트륨 채널 개방과 나트륨 이온 유입을 유발하여 막 전위 변화를 유발합니다.
이것은 기록 전극에 의해 측정된 활동 전위를 유도하고 VSD의 형광 특성을 변경합니다.
뇌 절편을 특정 파장에 노출시켜 VSD를 자극하고 형광 방출을 유발합니다.
자극 후 나트륨 채널은 닫히고 전압 개폐 칼륨 채널은 열려 칼륨 이온 유출을 촉진합니다.
이것은 막 전위를 다시 변경하고 결과적으로 VSD의 형광을 변경합니다.
형광을 실시간으로 기록하여 신경 활동을 시각적으로 표현합니다.
이 절차를 시작하려면 앰프, 컴퓨터 및 카메라 시스템을 켜고 소프트웨어를 엽니다. 50밀리리터 튜브에 aCSF를 붓고 카보겐으로 거품을 냅니다. 연동 펌프를 사용하여 aCSF를 순환시키고 유속을 분당 약 1밀리리터로 조정합니다.
그런 다음 실험실 내부의 액체 레벨이 항상 일정하도록 흡입 피펫의 높이를 조정합니다. 접지 전극을 챔버에 놓습니다. 그런 다음 유리 전극에 소량의 aCSF를 채우고 전극 홀더에 넣습니다. 홀더를 매니퓰레이터의 막대에 부착합니다.
증폭기를 사용하여 전극 저항이 약 1메가옴인지 확인하십시오. 기록 세션에서 습한 챔버에서 실험 챔버로 슬라이스를 옮깁니다. 링의 가장자리를 실리콘 O-링에 단단히 누릅니다. 멤브레인이나 실험실 바닥이 깨지지 않도록 주의하십시오.
현미경 아래에서 자극 전극의 끝과 자계 전위 기록 전극을 슬라이스 위에 놓습니다. 자극을 전달하여 유발된 반응을 확인하십시오. 시야가 광학 기록 시스템의 오른쪽 신경 회로를 덮고 있는지 확인합니다.
그런 다음 여기 광도를 카메라 최대 용량의 약 70%에서 80%로 조정합니다. 형광등을 사용하여 획득 시스템으로 초점을 조정합니다. 그런 다음 녹화를 시작하고 획득 후 이미지 획득 소프트웨어에서 데이터를 분석합니다.