Fiber Photometry를 사용하여 자유롭게 움직이는 마우스의 신경 활동 기록

이식된 광섬유 캐뉼라가 있는 자유롭게 움직이는 마우스로 시작합니다.

광섬유 패치 코드의 한쪽 끝을 캐뉼라에 연결하고 다른 쪽 끝을 여기 광원에 연결합니다.

마우스는 외측 시상하부 영역 또는 LHA 뉴런에서 녹색 형광단 태그가 있는 유전적으로 암호화된 칼슘 지표(GECI)를 발현합니다.

이식된 광섬유는 LHA 축삭이 끝나는 외측 habenula 또는 LHb 영역과 접촉합니다.

최적의 여기 파장에서 GECI를 여기시키고 기준선 신호를 기록합니다.

이제 마우스에 반복적으로 에어 퍼프를 적용하여 혐오적인 스트레스 반응을 불러일으

킵니다.

이 자극은 LHA 축삭 말단에서 활동 전위를 유발하여 전압 개폐 칼슘 채널을 열고 칼슘 유입을 허용합니다.

세포내 칼슘 이온은 GECI에 결합하여 녹색 형광 방출을 증가시키는 형태 변화를 유도합니다.

광 신호를 시각화합니다.

마우스의 공기 퍼프에 대한 반응으로 증가된 형광은 혐오 신호를 전달하는 LHA-LHb 경로의 역할을 확인합니다.

패치 코드 섬유의 말단 끝을 육안과 미니 섬유 현미경으로 검사하는 것으로 시작합니다. 섬유 표면이 긁힌 경우 미세한 입자가 있는 섬유 연마 필름을 사용하여 섬유를 다시 연마하십시오. 그런 다음 70% 에탄올과 면봉 어플리케이터로 패치 코드의 말단 끝을 청소합니다. 70% 에탄올과 면봉 어플리케이터를 사용하여 광섬유 캐뉼라를 청소합니다.

검은색 수축 튜브로 덮인 세라믹 분할 슬리브를 사용하여 패치 코드의 페룰 끝을 이식된 광섬유에 연결합니다. 연결하는 동안 슬리브가 단단히 조여져 있는지 확인하십시오. 동물이 몇 분 동안 회복되도록 한 다음 광 신호 기록을 시작하고 실험을 실행합니다. 녹음하는 동안 라이브 트레이스를 주의 깊게 관찰하여 고품질 녹음을 보장하고 슬리브가 충분히 조이지 않음을 나타내는 신호의 점프를 관찰하십시오.