신경 활동을 이미지화하기 위해 형질전환 마우스의 뇌에 광학 창 설치

머리를

머리 고정 어댑터에 고정한 마취되고 유전자 변형된 마우스로 시작합니다.

마우스 뇌는 신경 활동을 감지할 수 있는 형광 단백질을 발현합니다.

두피를 자르기 전에 면도하고 순차적으로 소독하십시오.

결합 조직을 제거하여 두개골을 노출시킵니다.

대상 영역을 표시하고 접착제 층을 바르십시오.

마이크로드릴을 사용하여 표시된 부위의 두개골을 얇게 만듭니다.

두개골 조각을 제거하여 뇌를 노출시킵니다.

뇌를 촉촉하게 유지하기 위해 인공 뇌척수액을 바르십시오.

해당

지역에 광학 창을 설치하고 접착제로 밀봉하여 시멘트 부착을 위한 기반을 제공합니다.

검은색 치과용 시멘트를 발라 빛을 차단합니다.

두개골의 반대쪽에서도 절차를 반복합니다.

동물이 회복되도록 하십시오.

신경 활동을 이미지화하려면 고정된 마취된 마우스를 현미경 아래에 놓고 이미지를 획득합니다.

마취된 20-25g, 1 및 1/2 내지 2 및 1/2개월 된 Thy1-GCaMP6s 마우스의 발가락 꼬집기에 대한 반응 부족을 확인하고 동물의 눈에 연고를 바릅니다. 멸균 드레이프로 덮인 가열 패드 위에 마우스를 놓고 마우스용 헤드 고정 어댑터를 사용하여 헤드를 안정시킵니다. 양날 면도기로 두피의 대부분을 면도하고 노출된 피부는 순차적으로 멸균 알코올 준비 패드와 포비돈-요오드 용액 스크럽으로 청소합니다. 그런 다음 가위를 사용하여 두피에 직사각형 2x3mm 자릅니다.

면봉을 사용하여 피부를 옆으로 밀어 직경 3mm 이상의 노출 영역을 만들고 뭉툭한 미세 수술 칼날을 사용하여 두개골에 부착된 결합 조직을 부드럽게 제거합니다. 치과용 드릴을 사용하여 S3 영역 주위에 직경 1mm 원을 부드럽게 표시합니다. 두개골 왼쪽에 비슷한 원을 그린 후 뼈 양쪽에 시아노아크릴레이트 초강력 접착제를 얇게 도포하여 치과용 시멘트 도포를 위한 기초를 제공합니다.

해부 현미경으로 고속 마이크로 드릴을 사용하여 S1 영역 주위의 두개골 오른쪽에 있는 원형 홈을 얇게 만들어 매끄러운 가장자리를 만들고 필요에 따라 진공으로 뼈 파편을 흡인합니다. 약 2/3의 뼈 깊이에 도달한 후 원형 뼈 플랩이 주변 두개골에서 완전히 제거될 때까지 나머지 뼈의 1/3을 천천히 조심스럽게 얇게 만듭니다. 한 쌍의 # 5/45 겸자를 사용하여 원형 뼈 조각을 천천히 조심스럽게 제거하여 경막을 노출시키면서 연막 혈관이 손상되지 않도록 주의합니다.

같은 방법으로 두개골 왼쪽에서 뼈 플랩을 제거한 후 멸균 식염수로 두개골