척수 절편의 실질체 젤라티노사 뉴런에서 기록하는 전체 세포 패치 클램프

쥐 척수 절편을 기록 챔버에 놓고 조직 앵커로 고정합니다.

인공 뇌척수액으로 슬라이스를 관류합니다.

현미경으로 반투명 질질 젤라티노사 또는 SG 영역을 식별하고 건강한 SG 뉴런을 선택합니다.

이온 용액으로 채워진 패치 피펫을 뉴런 근처에 놓습니다.

가벼운 양압을 가하여 피펫 팁에서 잔해물을 제거합니다.

피펫을 뉴런 쪽으로 움직입니다.

그런 다음 양압을 풀어 신경막에 보조개를 형성하여 밀봉을 만듭니다.

유지 전위를 변경하여 휴식막 전위 또는 RMP에 가깝게 만듭니다.

짧은 흡입을 사용하여 막을 파열시켜 전체 세포 구성을 설정합니다.

RMP에서 탈분극 전기 펄스를 적용합니다.

이 펄스는 전압 개폐 나트륨 채널을 열어 나트륨 이온의 빠른 유입을 허용합니다.

이러한 이온 유입은 활동 전위를 유발하여 뉴런 발화를 일으킵니다.

뉴런 발화 패턴을 기록합니다.

라티노사 또는 SG 뉴런에서 전체 세포 패치 클램프 기록을 수행하려면 칼륨 이온 기반 세포내 용액을 사용하여 기록하고 억제성 시냅스 후 전류 기록에만 세슘 양이온 기반 용액을 적용합니다.

척수 슬라이스를 기록실로 부드럽게 이동한 다음 최적의 슬라이스 안정성을 위해 나일론 실이 있는 U자형 백금 와이어로 단단히 안정시킵니다. 실온에서 기포가 있는 ACSF로 슬라이스를 꾸준히 관류하고 관류 속도를 분당 2-4밀리리터로 설정하여 충분한 산소 공급을 달성합니다.

그런 다음 저해상도 현미경 렌즈를 사용하여 SG 뉴런의 영역을 반투명 밴드로 식별합니다. 밝고 매끄러운 막을 가진 3차원 모양이 특징인 건강한 뉴런을 표적 세포로 선택하고 고해상도 대물렌즈를 사용하여 비디오 모니터 화면 중앙에 맞게 조정합니다.

마이크로피펫에 적절한 양의 칼륨 이온 기반 또는 세슘 이온 기반 세포내 용액을 채웁니다. 그런 다음 마이크로피펫을 전극 홀더에 삽입하고 세포내 용액이 홀더 내부의 은선과 접촉하고 있는지 확인합니다. 마이크로피펫에 초점을 맞추고 마이크로매니퓰레이터를 사용하여 ACSF에 담급니다. 가벼운 양압을 가하여 먼지와 이물질을 밀어냅니다.

마이크로피펫을 표적 뉴런 쪽으로 점차적으로 움직입니다. 피펫이 뉴런에 접근하고 신경막에 매우 작은 보조개가 형성되면 양압을 방출하여 기가씰을 형성합니다. 유지 전위를 세포의 생리적 휴지막 전위에 가까운 마이너스 70밀리볼트로 변경합니다.

그런 다음 마이크로피펫에 일시적이고 부드러운 흡입을 가하여 멤브레인을 파열시키고 양호한 전체 세포 구성을 만듭니다. 휴식 막 전위에서 25피코암페어 증분으로 25-150피코암페어의 일련의 1초 탈분극 전류 펄스로 전류 클램프에서 각 뉴런의 발화 패턴을 테스트하여 발화 특성을 기록합니다.