Combined Recording of Mechanically Stimulated Afferent Output and Nerve Terminal Labelling in Mouse Hair Follicles(쥐 모낭에서 기계적으로 자극된 구심성 출력과 신경 말단 라벨링의 결합 기록)

해부된 쥐 귓바퀴 또는 외이로 시작하여 연결된 신경이 노출됩니다.

기록용 신경을 기록 전극에 삽입합니다.

귓바퀴 가장자리 근처의 지방층을 제거하여 모낭 기저부를 노출시킨 다음 피부를 접어 모발을 노출시켜 자극을 줍니다.

기계적 자극 프로브를 배치하여 머리카락을 만지고 편향시킵니다.

이 자극은 감각 신경 말단을 활성화하고, 기계적으로 게이트된 이온 채널을 열고, 양이온 유입을 허용하고, 활동 전위를 생성합니다.

활동 전위는 이러한 말단을 통해 기록되는 신경으로 전파됩니다. 신호를 시각화합니다.

다음으로 형광 염료를 넣고 머리카락 자극을 계속합니다.

염료는 자극된 신경막에 결합하고 신경 활동에 영향을 주지 않고 엔도사이토시스를 통해 내재화됩니다.

자극 후 세척하여 결합되지 않은 염료를 제거합니다.

격

리제를 첨가하여 내재화되지 않은 막 결합 염료를 제거합니다.

형광 현미경을 사용하여 모낭의 염색을 시각화하여 기계적으로 자극된 신경 말단을 식별합니다.

자극 유발 활동 전위를 제어하여 기록하려면 세라믹 압전 액추에이터에 부착된 화재 연마 10cm 붕규산 미세 전극 유리의 기계적 프로브를 사용하십시오. 프로브가 피부 주름과 평행하게 움직이고 피부가 아닌 머리카락에 닿도록 프로브를 배치합니다. 피부 표면에서 약 1/2에서 1mm 위에 놓습니다. 그런 다음 프로브가 움직일 때 오디오 출력을 수신하여 자극을 수동으로 확인합니다.

이제 작은 영역의 머리카락에 기계적 자극을 가하도록 소프트웨어를 설정합니다. 예를 들어, 10초마다 5헤르츠 정현파에서 3초 자극을 프로그래밍합니다. 이를 위해서는 200에서 2000 미크론 사이의 프로브 변위가 필요합니다. 그런 다음 반복적인 자동 자극을 사용하여 신경에서 기록된 반응의 일관성을 확인합니다. 반복 가능한 결과를 얻을 수 있어야 합니다.

결과가 일관되면 반복 속도를 30초마다 낮춥니다. 추가 지침은 텍스트 프로토콜에 제공됩니다. 기계 감각 채널의 특성을 조사하고 모낭 주변의 기계 감각 말단에 라벨을 붙이려면 용액에 10마이크로몰 FM143을 첨가하고 진동 프로브로 모발을 계속 자극하면서 60분 동안 그대로 둡니다.

이 염료는 배양 및 달팽이관 유모 세포의 감각 뉴런에서 후보 변환기 채널을 차단합니다. 그러나 성숙한 모낭 구심성 신경의 발화를 제자리에서 차단하지 않습니다. 말단의 라벨링은 염료가 염료 노출 내내 기계적 자극에 계속 반응하는 말단 역할을 한다는 것을 보여줍니다.