Monitoring Seizure-Induced Neural Electrical Activity in Brain Slices Using Microelectrode Arrays(미세 전극 어레이를 사용한 뇌 절편에서 발작 유도 신경 전기 활동 모니터링)

테스트 약물이 포함된 인공 뇌척수액 또는 aCSF로 채워진 미세 전극 배열 또는 MEA 기록 챔버에 뇌 절편을 배치하는 것으로 시작합니다.

슬라이스의 위치를 조정하고 앵커로 고정합니다.

발작 유발 시험 약물을 포함하는 aCSF의 연속 흐름을 시작합니다.

슬라이스의 이미지를 캡처합니다.

뇌 절편과 접촉하는 적절한 미세 전극을 선택하십시오.

자극 장치를 활성화하고 전선을 MEA 장치에 연결합니다.

기준선 신호를 기록합니다.

최적의 자극 강도를 결정하기 위해 테스트 실행을 수행합니다.

이제 전기 펄스 전달을 시작하십시오.

이 펄스는 선택된 뇌 영역을 자극하여 인공 발작을 유발합니다.

발작 유발 반응을 포착하기 위해 결과 전기적 활동을 기록합니다.

4-AP aCSF 수준과 기록 온도가 원하는 대로 안정화되면 관류와 흡입 마개를 꺼짐 위치로 돌려 일시적으로 중지합니다. 거꾸로 된 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 하나의 뇌 절편을 MEA 기록 챔버로 빠르게 옮깁니다.

필요에 따라 불로 광택이 나는 컬 파스퇴르 피펫 또는 부드럽고 컴팩트한 작은 브러시를 사용하여 MEA 기록 영역에서 위치를 조정합니다. 브레인 슬라이스에 고정 앵커를 놓습니다. 마개를 다시 켜짐 위치로 돌려 관류와 흡입을 다시 시작합니다.

도립 현미경 스테이지에 장착된 카메라를 사용하여 뇌 절편 사진을 찍습니다. 그런 다음 컴퓨터 소프트웨어에서 mapMEA 스크립트를 실행하여 GUI를 시작하여 전극을 매핑합니다. 찾아보기 버튼을 클릭하여 뇌 슬라이스의 사진을 로드합니다. 기준 전극이 MEA의 왼쪽 절반 상단 열에 나타나는지 확인하십시오. 그런 다음 포인터 활성화 버튼을 클릭합니다.

어레이의 가장 왼쪽 열에서 상단 및 하단 전극을 선택하여 이미지 교정 및 전극 매핑을 위한 x, y 좌표를 표시합니다. 슬라이스 유형(Slice Type) 드롭다운 메뉴에서 수평(Horizontal) 을 선택합니다. 기본 구조 확인란을 선택합니다.

브레인 슬라이스 그림 아래에 있는 번호가 매겨진 푸시 버튼을 사용하여 ROI에 해당하는 전극을 선택하고 구조 패널에서 해당 푸시 버튼을 클릭하여 할당합니다. 각 ROI에 대해 이 단계를 반복합니다. 그런 다음 저장 버튼을 누릅니다. 소프트웨어는 선택한 전극과 ROI를 보고하는 테이블이 포함된 결과 폴더를 생성합니다.

전기생리학 연구의 경우 자극 프로토콜 최소 10분 전에 자극 장치를 켜서 자체 보정 및 안정화를 허용합니다. 그런 다음 자극