0 조회수 • 3:11 분 • July 8th, 2025
근육과 신경 가지가 노출된 해부된 초파리 유충이 들어 있는 페트리 접시를 현미경 스테이지에 놓습니다.
페트리 접시 내의 수조 용액에 기준 전극을 삽입합니다.
기록 전극에 등장성 용액을 채웁니다.
마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 이 전극을 운동 뉴런에 의해 지배되는 복부 근육 위에 배치합니다.
전극 끝을 신경 전달 물질을 포함하는 축삭 끝의 구조인 시냅스 부톤에 놓습니다.
자발적인 신경 전달 물질 방출에 대한 반응인 소형 흥분성 접합 전류 또는 mEJC를 지속적으로 기록합니다.
mEJC 진폭의 정확한 범위는 적절한 전극 위치를 확인합니다.
다음으로, 표적 근육을 자극하는 축삭 근처에 자극 전극을 배치합니다.
음압을 가하여 전극 내부의 축삭을 당깁니다.
자극전류를 점차적으로 증가시켜 활동 전위를 유도합니다.
이것은 축삭이 신경근 접합부에서 시냅스 전류로 기록되는 신경 전달 물질을 방출하도록 촉발합니다.
준비된 페트리 접시를 현미경 스테이지에 놓습니다. 수조에 기준 전극을 삽입합니다. 기록 전극에 HL3 용액을 채웁니다. 10x 대물렌즈 아래에서 전극을 욕조에 담그고 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 복부 세그먼트 2, 3 또는 4의 근육 6과 7 위에 놓습니다.
그런 다음 대물렌즈를 60X로 전환하고 epi-florescence 또는 DIC 광학을 사용하여 관심 영역에 초점을 맞춥니다. 전극 끝을 시냅스 부통 위에 놓은 다음 과도한 압력이 NMJ를 손상시키거나 자발적인 시냅스 활동의 증가를 유도할 수 있으므로 전극을 근육에 매우 부드럽게 누릅니다.
그런 다음 앰프, AD 보드 및 컴퓨터를 켭니다. 그런 다음 전압 클램프 앰프에서 모드를 선택합니다. 획득 소프트웨어를 시작하고 갭 프리 모드를 선택하고 컴퓨터 화면에서 mEJC의 모양을 관찰합니다. mEJC의 진폭이 0.2에서 0.7나노암페어 범위에 있는지 확인하십시오.
시각적 제어 하에 마이크로 조작기를 사용하여 자극 전극을 복부 분절 2에서 4를 자극하는 축삭 근처에 배치합니다. 전극 홀더에 연결된 주사기의 피스톤을 당겨 음압을 가하여 축삭이 전극 내부로 당겨지도록 합니다.
다음으로 자극기를 켭니다. 절연 장치의 노브를 돌려 전류를 0으로 설정한 다음 EJC가 나타날 때까지 또는 임계값에 도달할 때까지 전류를 부드럽게 늘립니다. EJC 관찰을 위한 임계값에 비해 자극 전류가 약 두 배 증가하여 역치 초과 체제에서 자극을 수행합니다.