뇌 절편의 뉴런 연구를 위한 자동화된 이미지 유도 패치 클램프 기법

기록실에서 고정된 뇌 절편으로 시작합니다.

현미경의 카메라 제어 소프트웨어를 사용하여 대상 영역에 초점을 맞춥니다

여기 조명을 켜고 서로 다른 깊이에서 여러 장의 사진을 찍습니다.

이 소프트웨어는 형광 표지 된 세포의 좌표를 감지합니다.

이제 기록 전극이 들어 있는 용액으로 채워진 패치 피펫을 챔버에 배치합니다.

적절한 소프트웨어를 사용하여 위치 제어를 교정하십시오.

고배율에서 형광 표지 세포를 정확하게 표적으로 삼도록 대조군을 재보정합니다.

대상 셀의 좌표를 선택합니다.

패치 피펫의 자동 하강을 시작합니다.

컴퓨터는 전극을 통해 저항을 모니터링합니다. 음압을 가하면 피펫이 세포막과 접촉하여 저항이 증가하면 기가씰 형성을 나타냅니다.

그 후, 소프트웨어는 세포막을 뚫고 전체 세포 패치 구성을 얻는 압력을 더욱 줄입니다.

이 단계에서는 하나의 뇌 슬라이스를 기록 챔버 중앙에 배치합니다. 슬라이스 홀다운이나 하프로 뇌 슬라이스를 안정시킵니다. 형광 셀을 검출하려면 4배 배율로 관심 영역을 찾으십시오. 그런 다음 "클릭 투 이동" 모드를 켜서 현미경 스테이지를 이동하고 관심 영역의 중심을 클릭합니다. 그런 다음 고배율 렌즈로 전환하고 키패드의 RF를 사용하여 현미경을 z축으로 움직여 초점을 조정합니다.

이 소프트웨어는 카메라의 현미경이 다양한 깊이에서 일련의 이미지를 촬영하도록 지시합니다. 그런 다음 이러한 이미지를 컴퓨터 비전 처리를 거쳐 형광 표지된 세포를 찾습니다. 기본 열에서 셀 감지 버튼, 단위 0을 클릭합니다. 셀 좌표 목록이 메모리 위치의 GUI에 나타납니다. 좌표 옆에 있는 X 버튼을 클릭하여 목록에서 원하지 않는 셀을 제거합니다.

그런 다음 관심 있는 셀을 클릭합니다. 셀에 숫자가 있는 노란색 점이 나타나고 셀의 좌표가 메모리 위치의 GUI에 나타납니다. 피펫 오프셋 좌표를 감지하기 위해 2차 보정을 수행하려면 유리 피펫의 1/3을 내부 용액으로 채웁니다. 그런 다음 헤드 스테이지에 부착된 피펫 홀더에 피펫을 로드합니다.

낮은 배율에서 키패드의 1과 2를 사용하여 유닛 1과 유닛 2 사이를 전환합니다. 그런 다음 피펫을 시야로 가져오고 키패드를 사용하여 초점을 조정합니다.

그런 다음 Load Calibration을 클릭하여 기본 보정을 로드합니다. 현미경 렌즈를 고배율로 전환하고 기본 GUI에서 40번 클릭합니다. 피펫 팁을 중앙으로 가져옵니다. 그런 다음 사용 중인 장치 아래의 기본 GUI에서 보조