생체 외 쥐 결장에서 결장 구심성 신경의 전기생리학적 기록

균형 잡힌 전해질 용액에 고정된 마우스 결장 세그먼트를 포함하는 전기생리학 설정으로 시작합니다.

결장에는 결장에서 뇌로 신호를 전달하는 사전 해부된 결장 구심성 감각 신경 가지가 있는 노출된 주요 골반 신경절이 있습니다.

결장은 식염수 주입을 위한 3방향 밸브로 양쪽 끝에 캐뉼라가 있습니다

.

기록 전극을 채우고 구심성 신경 근처에 배치합니다.

가벼운 흡입을 가하여 신경을 전극 안으로 끌어당겨 단단히 밀봉합니다.

기본 신경 전기 신호와 결장의 내부 압력을 모니터링합니다.

식염수를 결장에 지속적으로 주입하면서 출구 캐뉼라의 수도꼭지를 닫습니다.

이로 인해 결장 내부의 압력이 점진적으로 상승하여 결장이 팽창하고 구심성 신경이 자극됩니다.

신경 신호와 결장 압력을 다시 기록합니다.

압력이 증가함에 따라 신경 신호가 점진적으로 상승하면 구심성 신경 자극이 확인됩니다.

해

부 현미경으로 미리 당겨진 유리 피펫을 검사합니다. 한 쌍의 집게로 전극의 끝을 부러서 기록할 신경의 직경과 양립할 수 있는 크기가 되도록 합니다. 그런 다음 팁을 더 가벼운 플레어 가까이에 놓아 경사

지게 합니다.

이 방법론을 처음 접하는 개인은 신경의 크기와 호환되는 전극 끝을 경사지게 하는 것이 까다로울 수도 있습니다.

그런 다음 경사진 전극을 전극 홀더에 놓습니다. 그런 다음 전극에 음압 또는 양압을 가하기 위해 홀더의 측면 포트에 10밀리리터 주사기를 연결합니다. 그런 다음 홀더를 바이오앰프의 헤드 스테이지에 연결하고 헤드 스테이지를 매니퓰레이터에 장착합니다.

그런 다음 전극을 조직 욕조로 옮기고 홀더의 은선에 닿을 때까지 부드럽게 흡입하여 전극에 크렙스 용액을 채웁니다. 그런 다음 전극 끝을 신경의 절단 끝 부분에 가깝게 놓고 음압을 가하여 신경을 전극 안으로 빨아들입니다. 그런 다음 더 많은 음압을 가하여 약 1mm의 신경이 전극으로 당겨져 단단히 밀봉되도록 합니다.

이제 바이오 증폭기를 켜고 필터를 300에서 3,000헤르츠로 설정합니다. 오실로스코프의 신호를 모니터링하고 스파이크 데이터 처리 소프트웨어에 신경 신호와 내강 내 압력 신호를 기록합니다. 다음으로, 출구 캐뉼라의 3방향 탭을 닫고 관내로 지속적으로 주입하여 결장의 램프 팽창을 적용합니다. 60mm 수은에 도달할 때까지 내강 내 압력을 모니터링합니다.