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신경과학
0 조회수 • 2:43 분 • July 8th, 2025
배양 배지에서 대뇌 혈관 내피 또는 CVE 세포로 시작합니다.
CVE 세포는 뇌의 혈관을 감싸고 있으며 뇌 생리학에 필수적인 에너지 요구가 높은 세포입니다.
세포를 세포외 플럭스 세포 배양 플레이트에 넣습니다. 세포 부착을 위해 배양합니다.
배양 배지를 원하는 pH를 갖는 세포외 플럭스 분석 배지로 교체합니다.
pH를 유지하기 위해 이산화탄소 없이 배양합니다.
다음으로 센서와 바닥판이 포함된 세포외 플럭스 센서 카트리지를 가져옵니다.
플레이트에 교정 용액을 추가하고 이산화탄소 없이 배양하여 센서에 수화를 공급합니다.
이 센서는 미토콘드리아 활동을 나타내는 세포외 환경의 산소 농도 변화를 측정할 수 있습니다.
그런 다음 카트리지를 바이오 분석기에 넣고 센서를 교정합니다.
바닥판을 세포가 들어 있는 판으로 교체합니다.
CVE 세포의 미토콘드리아 기능을 측정합니다.
적절한 수의 계대배양 후, 웰당 80마이크로리터의 완전 배지에 1.6 x 104개의 세포를 96웰 세포외 플럭스 세포 배양 플레이트에 시드하고 플레이트를 5% 이산화탄소가 함유된 섭씨 37도 인큐베이터에 넣습니다.
미토콘드리아 기능 평가 분석 전날, 세포외 플럭스 센서 카트리지에 150마이크로리터의 세포외 플럭스 보정 용액을 수화시키고 이산화탄소 없이 섭씨 37도에서 밤새 플레이트를 배양합니다.
다음날 아침, 플레이트 워셔 스테이션을 사용하여 세포 배양 배지를 pH 7.0 세포외 플럭스 분석 배지로 변경한 다음 이산화탄소 없이 섭씨 37도에서 30-60분 동안 세포를 배양합니다. 세포가 평형을 이루면 수화 카트리지를 바이오 분석기에 넣고 시작 버튼을 클릭하여 보정을 시작합니다.
보정이 끝나면 카트리지 잠금 해제 프롬프트를 클릭하여 카트리지 바닥 플레이트를 제거하고 세포 플레이트를 로드한 다음 데이터 파일을 열어 스프레드시트 파일로 내보낼 바이오 분석기에서 속도 값을 얻습니다.