발작 유도 물질에 대한 반응으로 multi-electrode array를 사용한 뇌 피질 모니터링

전대상피질(ACC)과 시상 영역을 포함하는 뇌 절편으로 시작합니다.

앵커를 사용하여 뇌 절편을 산소가 함유된 인공 뇌척수액이 관류된 전기 신호 측정 장치인 다중 전극 어레이 또는 MEA 챔버에 고정합니다.

경두개 직류 자극 또는 tDCS 전극을 하나는 ACC 근처에 배치하고 다른 하나는 ACC의 원위부에 배치하여 뇌 절편에 직류를 전달합니다.

기준선 신호를 기록하고 tDCS를 통해 슬라이스에 전류를 전달합니다.

전극 길이와 tDCS 전류를 조정하여 고품질 신호를 얻습니다.

자극 전극을 사용하여 시상에 전류 펄스를 전달하여 ACC를 자극하여 인공 발작을 유도합니다.

ACC 반응을 얻기 위해 시상과 ACC를 연결하는 시상-대상

MEA를 통해 기록하십시오.

발작 유발 약물을 MEA 챔버에 주입

자극 전극을 사용하여 시상-대상 경로에 전기 펄스를 전달하고 약물 유발 ACC 반응을 기록합니다.

다중 채널 시스템에 MEA 프로브의 배치를 확인합니다. 한 튜브를 사용하여 ACSF를 MEA 챔버로 안내하고 다른 튜브를 사용하여 ACSF를 챔버 밖으로 안내합니다. 섭씨 30도에서 따뜻한 산소화 ACSF로 제제를 지속적으로 관류합니다. 젖은 면봉을 사용하여 뇌 절편을 MEA로 옮깁니다.

뇌 슬라이스를 조심스럽게 움직여 ACC를 전극 위의 방향으로 향하게 합니다. 그런 다음 슬라이스와 전극 사이의 전기적 연결이 양호하도록 슬라이스 앵커로 뇌 슬라이스를 안정화합니다. 그런 다음 양극 전극을 ACC 근위부에 배치하고 음극 전극을 ACC 원위부에 배치합니다. MEA의 두 자기장 방향에 따라 전계 강도를 기록합니다. 그런 다음 자극기를 사용하여 전류를 전달합니다.

두 개의 염화은 전극 사이의 거리를 약 1.5-2센티미터로 조정하고 자극기의 전류 강도를 조정하여 DCS를 0.5-2밀리암페어 사이로 만듭니다. 이 절차에서는 MT에 텅스텐 전극을 놓고 자극기에서 슬라이스의 시상 부위로 펄스를 전달합니다. 다음으로, 다양한 전류 강도를 사용하여 ACC 응답을 유도하는 임계값을 결정합니다.

최적의 반응 프로필을 얻기 위해 시상-대상이 경로를 따라 텅스텐 전극을 움직입니다. 10-20개의 ACC 반응을 기록하고 소프트웨어를 사용하여 빈 자극에 의해 유발된 모든 ACC 반응의 평균을 자동으로 평균화합니다.

발작 유사 활성을 유도하려면 AP용 250마이크로몰과 관류액에 5마이크로몰 비쿠쿨린을 첨가하고 슬라이스를 2-3시간 동안 계속 관류합니다. 펌프를 비교적 빠른 관류 속도로 유지하면 pH 구배가 쌓이는 것을 방지하는 데 도움이 될 수 있습니다. 그런 다음 텅스텐 전극을 MT에 놓고 전기 자극을 전달하여 ACC 반응 프로필을 얻습니다. 10-20개의 스윕을 기록하고 응답의 평균을 내립니다. 그런 다음 관류 용액을 새 ACSF로 교체하여 약물을 씻어냅니다.