시냅스 공동 배양에서 배쪽 해마 축삭을 따라 니코틴 유도 칼슘 신호 전달 이미징

커버슬립에서 마우스 복부 해마 절편과 측좌핵 뉴런의 유전자 변형 공동 배양을 취하십시오.

해마 뉴런은 니코틴성 아세틸콜린 수용체를 과발현하는 시냅스 전 축삭 말단을 투사하여 시냅스 후 측좌핵 뉴런과 시냅스를 형성합니다.

뉴런에는 세포내 칼슘 측정을 위한 칼슘 지시 염료가 로드됩니다.

커버슬립을 칼슘 이온을 함유한 완충액으로 관류된 공초점 현미경 챔버로 옮깁니다.

해마 축삭 돌출부의 형광 이미지를 대조군으로 캡처합니다.

해마 뉴런의 니코틴성 아세틸콜린 수용체에 결합하여 칼슘 유입을 유발하는 니코틴을 관류합니다.

칼슘 이온은 세포내 염료에 결합하여 형광을 증가시킵니다.

해마 축삭은 흥분성 신경 전달 물질을 방출하여 측좌핵 뉴런에서 시냅스 전달을 시작합니다.

니코틴을 제거하기 위해 완충액으로 세척하십시오.

시간이 지남에 따라 니코틴성 아세틸콜린 수용체 활성화는 세포 내 저장고에서 칼슘 방출을 유발하여 염료 형광을 증가시키고 복부 해마 축삭을 따라 지속적인 칼슘 신호 전달을 나타냅니다.

배양액을 한 번에 하나씩 이미징 챔버로 옮깁니다. 사전 니코틴 제어로 복부 해마 마이크로 슬라이스에서 축삭 돌출부의 기준선 형광단 형광 이미지를 수집합니다.

그런 다음 1분간 분당 2밀리리터의 급속 관류로 니코틴 1마이크로몰을 도포한 다음 HBS 칵테일로 니코틴을 씻어냅니다. 니코틴 적용 전, 도중, 후에 30분 동안 10초마다 타임랩스 이미지를 계속 캡처합니다.