신생아 설치류의 뇌간-척수 제제의 전기생리학적 기록

산소가 함유된 aCSF의 흐름이 있는 기록 챔버에서 갓 태어난 설치류로부터 뇌간-척수 준비를 확보합니다. 제제를 덮고 있는 얇은 조직을 제거합니다.

뇌간의 신경 네트워크는 호흡을 제어하기 위해 척수의 네 번째 복부 또는 C4 신경근의 운동 뉴런을 통해 전달되는 흡기 폭발이라고 하는 리드미컬한 전기 활동을 생성합니다.

기록 피펫을 신경근 근처에 놓고 흡입을 사용하여 신경근을 안쪽으로 끌어당겨 밀봉을 형성합니다.

뇌간 뉴런의 고유한 특성은 나트륨 유입을 일으켜 막을 탈분극시키고 활동 전위를 생성한 다음 재분극을 위해 칼륨 유출을 일으킵니다.

그에 따른 과분극은 나트륨-칼륨 ATPase가 ATP를 활용하여 막 전위를 회복할 때까지 새로운 활동 전위를 방지합니다.

활동 전위는 리드미컬한 폭발로 신경근으로 전파됩니다.

산소가 부족한 aCSF를 흐르면 ATP 생성이 방해되고 ATPase 기능이 손상되어 활동 전위를 지연시키고 리드미컬한 폭발을 감소시킵니다.

산소가 공급된 aCSF로 다시 전환하면 리드미컬한 버스트 횟수가 회복됩니다.

이 절차에서는 신경 조직을 복부가 위를 향하도록 기록실에 넣습니다. 척수의 가장 낮은 부분과 뇌간의 가장 부분에 핀으로 고정합니다. 그 후, 신경 조직의 표면을 덮고 있는 얇은 조직인 지주막을 제거합니다. 신경 조직의 연막과 혈관을 제거하지 않도록 주의하십시오. 그런 다음 전극에 ACSF를 채웁니다.

마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 전극을 네 번째 복부 뿌리 가까이에 조심스럽게 배치합니다. 주사기를 사용하여 신경 뿌리를 부드럽게 흡인합니다. 그런 다음 신경근이 있는 전극을 척수에 대고 놓습니다. 그 후, 제제의 기본 매개변수를 결정하기 위해 최소 20분 동안 정상 산소 조건에서 신경 조직에 의해 생성된 전기생리학적 활동을 기록합니다.

관류 용액을 카보겐 버블 ACSF에서 저산소증 자극 ACSF로 전환하고 15분 동안 기록합니다. 그런 다음 관류 용액을 표준 카보겐 버블 ACSF로 다시 전환하고 기록을 종료하기 전에 최소 15분 동안 더 기록합니다.