0 조회수 • 2:42 분 • July 8th, 2025
살아있는 초파리 유충 신경근 제제를 칼슘이 없는 식염수가 들어 있는 기록 챔버에 넣습니다.
유충 뉴런은 빛에 민감한 양이온 채널을 발현합니다.
형광 염료가 포함된 칼슘 첨가 식염수로 전환하십시오.
염료는 내재되지 않은 상태에서는 약하게 형광을 발하지만 뉴런에 의해 내재될 때 강
하게 형광을 발합니다.파란색 빛으로 유충을 비춥니다.
이것은 채널을 활성화하여 양이온 유입과 뉴런 탈분극을 유도하여 활동 전위를 시작합니다.
활동 전위는 신경근 접합부의 시냅스 말단에 도달하여 칼슘 유입과 소포 엑소 사이토시스를 허용합니다.
그 후, 염료 결합 막은 소포 재활용 중에 내재화됩니다.
칼슘이 없는 식염수로 세척하여 소포 재활용을 멈추고 내재화되지 않은 염료를 제거합니다.
형광 신호를 시각화합니다.
다음으로 무염료 칼슘 첨가 식염수를 넣고 다시 조명합니다.
이것은 또 다른 활동 전위, 칼슘 유입 및 염료 함유 소포 엑소사이토시스를 유도합니다.
신호를 다시 시각화합니다.
소포성 엑소사이토시스에 의한 염료 방출은 소포 내재화 중 상태에 비해 형광을 감소시킵니다.
채널로돕신 자극의 경우 동축 케이블을 사용하여 프로그래밍 가능한 자극기에 파란색 LED를 연결하고 LED를 카메라 포트에 배치합니다. 현미경 줌 기능을 사용하여 FM 염료로 제제에 파란색 LED 광선을 집중시킵니다.
절차의 이 시점에서 가장 중요한 단계는 LED 설정이 일정하게 유지되고 일관된 자극 강도를 보장하기 위해 비교되는 모든 조건에 대해 각 동물의 동일한 부분을 비추는 것입니다.
빛 자극을 시작하고 미리 결정된 광유전학적 자극 기간 동안 타이머로 추적합니다. 타이머가 멈추면 FM 염료 용액을 빠르게 제거하고 칼슘이 없는 식염수로 교체하여 SV 사이클링을 중지합니다. FM 염료 언로딩의 경우 광유전학적 자극 기간의 미리 결정된 기간 동안 빛 자극을 시작하고 타이머로 추적합니다. 타이머 기간이 끝나면 FM 염료 용액을 빠르게 제거하고 칼슘이 없는 식염수로 교체하여 SV 사이클링을 중지합니다.