0 조회수 • 3:50 분 • July 8th, 2025
기록실에서 표적 영역이 있는 뇌 슬라이스를 고정합니다.
내부 용액이 들어 있는 기록 피펫을 시냅스 후 뉴런 위에 배치하고 전체 세포 구성을 달성합니다.
시냅스 전 뉴런 근처에 검색 패치 피펫을 도입합니다.
이 피펫은 시냅스 전 세포를 찾는 동안 뉴런 탈분극을 방지하기 위해 나트륨 기반 용액으로 채워
져 있습니다.부드러운 흡입을 사용하여 검색 피펫으로 느슨한 밀봉 구성을 설정합니다.
막 전위를 유지하고 큰 전류 펄스를 적용하여 시냅스 전 뉴런에서 활동 전위를 유발합니다.
이 자극에 대한 시냅스 후 반응을 모니터링합니다.
반응이 감지되지 않으면 다른 시냅스 전 뉴런을 패치하고 자극을 반복합니다.
시냅스 후 뉴런에서 반응이 관찰될 때까지 이 과정을 계속합니다.
검색 피펫을 기록 피펫으로 교체하고 시냅스 전 뉴런에서 전체 세포 구성을 설정합니다.
전류 펄스를 적용하여 시냅스 전 뉴런에서 활동 전위를 유도하고 시냅스 후 반응을 기록합니다.
대상 영역의 조각을 준비한 후 배양합니다. 이 시간 동안 길고 가느다란 생크가 있어야 하는 패치 피펫을 당깁니다. 실험실에서 백금 하프로 뇌 조각을 고정한 후 기록 피펫에 내부 용액을 채웁니다.
피펫을 프리앰프에 놓고 전체 세포 모드에서 추정되는 시냅스 후 뉴런을 패치합니다. 칼륨염이 나트륨염으로 대체되는 내부 용액으로 채워진 8-10메가옴 저항의 탐색 패치 피펫을 사용하여 탐색 피펫에 부드러운 흡입을 가하여 느슨한 세포 부착 구성에서 잠재적인 시냅스 전 뉴런을 패치합니다.
느슨한 밀봉 아래의 멤브레인 전위를 전류 클램프 모드에서 음의 30밀리볼트에서 음의 60밀리볼트 사이로 유지합니다. 그런 다음 0.2 내지 2 나노암페어의 큰 전류 펄스를 적용하여 잠재적인 시냅스 전 세포에서 활동 전위를 유도합니다.
이 작용 전위를 전압 응답에 작은 스파이크가 켜진 것으로 관찰하십시오. 시냅스 후 반응의 런다운을 방지하기 위해 자극 주파수를 0.1헤르츠로 설정합니다. 시냅스 후 뉴런이 테스트된 잠재적으로 시냅스 전 뉴런의 자극에 반응하지 않으면 느슨한 밀봉 모드에서 새로운 잠재적 시냅스 전 뉴런을 패치합니다.
이러한 방식으로 최대 30개의 잠재적인 시냅스 전 뉴런을 테스트하고, 30메가옴 이상의 저항을 가진 밀봉이 설정될 수 있는 한 동일한 검색 패치 전극을 계속 사용합니다.
느슨한 밀봉 모드에서의 자극으로 인해 시냅스 후 뉴런에서 잠복 시간이 5밀리초 미만인 EPSP 또는 IPSP가 발생하면 시냅스 전 뉴런에서 검색 피펫을 제거합니다.
4-8메가옴의 저항을 가진 일반 내부 용액을 포함하는 바이오시틴으로 채워진 기록 패치 전극을 사용하여 시냅스 전 뉴런을 패치하고 전체 세포 전류 클램프 모드로 기록합니다. 시냅스 전 뉴런에 전류 주입을 통해 활동 전위를 유도하고 시냅스 후 반응을 기록합니다.