온전한 쥐 등쪽 뿌리 신경절에 대한 전체 세포 패치 클램프 기록

고정

된 쥐 후근 신경절(DRG)을 aCSF로 관류된 기록 챔버에 복용합니다.

DRG에는 위성 신경교세포로 둘러싸인 감각 뉴런이 포함되어 있습니다.

세포내 용액으로 채워지고 증폭기에 연결된 패치 피펫에 양압을 가한 다음 표적 뉴런 쪽으로 전진시킵니다.

양압은 주변 위성 신경교세포층을 가로지르고 뉴런과 접촉하여 막에 움푹 들어간 곳을 형성하는 데 도움이 됩니다.

음압을 가하여 멤브레인과 단단히 밀봉됩니다.

다음으로, 음압 펄스를 적용하여 전체 셀 구성을 설정합니다. 정확한 신호 측정을 위해 증폭기 매개변수를 교정합니다.

뉴런의 흥분성을 결정하려면 뉴런에 짧은 증분 전류를 적용하여 전압 개폐 이온 채널을 열고 활동 전위를 트리거합니다.

활동 전위를 유발하는 데 필요한 최소 전류인 가변염기를 측정합니다.

또한, 램프 전류를 적용하여 활동 전위가 발생하는 최소 멤브레인 전위를 측정합니다.

이 절차에서는 전극 용액을 얼음 위에 올려 열화를 방지합니다. 다음으로, 유리 패치 피펫에 여과된 세포내 용액을 채웁니다. 그런 다음 피펫을 헤드 스테이지 피펫 홀더에 놓습니다.

피펫을 수조 용액에 내리기 전에 플런저를 약 1밀리리터 변위시켜 5밀리리터 주사기를 통해 피펫에 부드러운 양압을 가합니다. 그런 다음 증폭기에서 V-clamp 모드를 선택하고 소프트웨어에서 멤브레인 테스트 인터페이스를 엽니다.

현미경으로 피펫을 표적 뉴런 가까이 이동합니다. 다음으로, 뉴런과 위성 신경교세포의 주변 층 사이의 공간이 갑자기 확대될 때까지 피펫에서 양압을 가하여 위성 신경교세포층을 가로지릅니다. 그런 다음 뉴런에 보조개가 관찰될 때까지 피펫을 뉴런 쪽으로 계속 움직입니다.

우리의 준비에서 뉴런은 위성 신경교세포로 둘러싸여 있습니다. 따라서 신경교세포층을 관통하고 개별 뉴런에 도달하기 위해 기록 피펫은 높은 양압으로 유지됩니다.

그 후 양압을 줄이십시오. 부드러운 흡입으로 기가옴 밀봉을 달성합니다.

전체 세포 기록 구성을 얻으려면 짧지만 강한 흡입을 통해 뉴런 세포막을 관통합니다.

또는 zap 기능을 사용하십시오 amp흡입이 적용되는 동안 liifier.

전체 셀 모드가 설정되면 증폭기의 정전 용량 및 저항 보상 노브를 돌려 전체 셀 정전 용량 및 직렬 저항을 보상합니다. 그런 다음 멤브레인 테스트 창을 닫습니다. I-clamp 모드 노브를 돌려 일반 모드 모드 ampliifier.

그런 다음 소프트웨어에서 프로토콜 열기를 클릭합니다. 레오베이스