신경 세포에서 단백질 추출

0 조회수1:58 • July 8th, 2025

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커버슬립에 부착된 신경암세포가 포함된 세포 배양액을 채취하여 추운 조건에서 유지합니다.

배양 배지를 제거하고 잔류 배지를 제거하기 위해 차가운 인산염 완충액으로 세포를 반복적으로 세척합니다.

저농도의 비이온성 세제 및 프로테아제 억제제를 함유한 용해 완충액을 첨가합니다.

비이온성 세제는 세포막을 파괴하여 용해를 시작합니다.

한편, 프로테아제 억제제는 세포 단백질 분해 효소를 차단하여 효소 분해로부터 단백질을 보호합니다.

다음으로, 세포 스크레이퍼를 사용하여 커버슬립에서 부분적으로 용해된 세포를 제거합니다.

내용물을 용해 완충액이 들어 있는 튜브로 옮깁니다.

추운 조건에서 균질화기를 사용하여 세포를 기계적으로 용해하여 완전한 세포 용해와 단백질 방출을 보장합니다.

세포 용해물을 원심분리합니다.

상청액을 새 튜브에 모으십시오.

신경 종양 세포에서 추출된 단백질은 이제 추가 분석을 위한 준비가 되었습니다.

단백질 발현 검증을 위해 형질감염 후 48시간 후에 배양 접시를 얼음 위에 놓고 PBS로 세포를 두 번 세척합니다. 각 접시의 세포를 200-400마이크로리터의 용해 완충액으로 처리하고 세포 스크레이퍼를 사용하여 커버슬립에서 세포를 제거합니다.

각 플레이트에서 분리된 세포를 개별 미세 원심분리기 튜브로 옮기고 얼음 아래에서 균질화기로 세포를 추가로 해리합니다. 1분 후, 원심분리에 의해 균질화된 세포 조각을 펠릿

화합니다.

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