Modeling Neuronal Injury in Mouse Primary Cerebellar Granule Neurons(마우스 1차 소뇌 과립 뉴런의 뉴런 손상 모델링)

마우스 일차 소뇌 과립 뉴런의 배양으로 시작합니다.

흥분성 신경전달물질 수용체 작용제인 N-메틸-D-아스파르테이트(NMDA)와 공동 작용제인 글리신을 고농도로 첨가합니다. 배양을 배양합니다.

NMDA와 글리신은 NMDA 수용체의 해당 부위에 결합하여 과도한 자극을 유발하고 칼슘 이온의 대량 유입을 유발합니다.

증가된 세포내 칼슘은 칼슘 의존성 포스포리파아제를 활성화하여 세포막 인지질을 분해하여 막 손상을 초래합니다.

또한 세포 내 칼슘은 세포 단백질을 분해하는 프로테아제를 활성화합니다.

칼

슘 수치 상승은 또한 미토콘드리아 스트레스와 단편화를 유도하여 활성 산소종(ROS)을 방출하고 산화 스트레스를 유발합니다.

또한 세포내 칼슘은 DNase를 활성화하여 ROS와 함께 DNA 손상을 일으켜 궁극적으로 신경 세포 사멸을 초래합니다.

신호 전달 캐스케이드를 중단하기 위해 NMDA 및 글리신이 없는 신선한 배지로 배지를 교체합니다.

NMDA 유발 신경 손상 모델은 추가 분석을 위한 준비가 되었습니다.

NMDA로 신경 흥분 독성을 유도하기 위해 시험관 내에서 7일 후, 소뇌 과립 뉴런을 100마이크로몰 NMDA와 10마이크로몰 글리신으로 1시간 동안 치료합니다. 그런 다음 배지를 처리하지 않고 병렬 배양의 컨디셔닝 배지로 교체합니다. 이 농도는 처리 후 24시간에 50%의 세포 사멸을 초래합니다.