JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 2:59 분 • July 8th, 2025
강화된 녹색 형광 단백질을 발현하도록 유전자 조작된 쥐 거대세포 바이러스의 현탁액을 섭취하여 시각화를 가능하게 합니다.
바늘이 부착된 주사기에 현탁액을 넣습니다.
다음으로, 쥐 강아지를 얼음 위에 올려 마취시킵니다.
강아지 머리의 주사 부위를 식별하십시오.
바늘이 뇌의 측심실, 뇌척수액 또는 뇌척수액으로 채워진 공동에 도달할 때까지 두개골 표면에 수직으로 바늘을 삽입합니다.
서스펜션을 측심실에 주입합니다.
강아지가 회복되도록 하십시오.
주입된 바이러스는 심실 CSF를 통해 순환하여 변연 부위의 뇌실막 세포와 맥락총의 상피 세포에 도달합니다.
바이러스는 이러한 세포의 표면 수용체에 부착되어 내면화되고 복제를 거치며 세포에서 세포로 퍼져 맥락총 신경총, 변연 영역 및 뇌실하 영역에 급성 감염을 일
으킵니다.10마이크로리터 주사기와 27게이지 바늘을 70% 알코올로 소독하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 주사기의 플런저를 조심스럽게 당겨 5마이크로리터의 쥐 거대세포바이러스 주사 용액 또는 형광 마이크로비드를 바늘에 넣습니다.
P0.5 신생아 마우스를 얼음 위에 3-4분 동안 놓아 마취하고 고정시킨 후, 발가락 꼬집기 반응 방법을 사용하여 마취 깊이를 결정합니다. 시상 봉합사의 측면 약 0.7-1.0mm, 신생아 bregma에서 꼬리 0.7-1.0mm 위치에 무독성 실험실 펜으로 마취된 마우스의 주사 부위를 표시합니다. 이 다이어그램은 사이트를 더 자세히 보여줍니다.
참고로 바늘 끝에서 2mm 떨어진 곳에 무독성 마커로 표시하십시오. 그런 다음 표시된 주사 부위의 두개골 표면에 수직으로 2mm 깊이의 바늘을 삽입합니다. 그런 다음 두피를 열지 않고 5마이크로리터의 쥐 거대세포바이러스를 측심실에 천천히 주입합니다.
다른 마우스 그룹에 동일한 방법으로 형광 마이크로비드가 포함된 5마이크로리터 용액을 주입합니다. 주사 후 역류를 방지하기 위해 바늘을 10-20초 동안 제자리에 두십시오. 그런 다음 천천히 바늘을 제거합니다. 주사된 동물이 움직임과 전반적인 반응이 회복될 때까지 따뜻한 용기에 5-10분 동안 회복되도록 합니다.