뇌실주위 내피 세포의 화학매력 신호에 대한 인터뉴런 반응 평가

JoVE Encyclopedia of Experiments

신경과학

0 조회수 • 2:19 분 • July 8th, 2025

세포 부착을 위해 폴리머 코팅 접시에 3구획 배양 인서트를 고정합니다.

접시를 뒤집고 중간 구획을 표시한 다음 방향을 바꿉니다. 이 구획에 인터뉴런을 포함하는 배지를 추가합니다.

인간 뇌실주위 내피 세포 또는 PVEC, 뇌 혈관 세포를 포함하는 배지를 외부 구획 중 하나에 추가합니다.

다른 외부 구획에 비뇌실주위 내피 세포를 포함하는 배지를 대조군으로 추가합니다.

폴리머 건조를 방지하기 위해 접시에 공동 배양 배지를 추가합니다. 세포 접착을 위해 배양합니다.

인서트를 분해하여 각 세포 유형 사이에 작은 세포가 없는 간격이 있는 직사각형 세포 패치를 만듭니다.

공동 배양 배지로 새로 고치고 배양합니다.

내피 세포는 중간 뉴런이 세포가 없는 공간으로 이동하도록 촉발합니다.

한편, PVEC는 PVEC 함유 패치를 향한 중간 뉴런의 이동을 향상시키는 화학적 유인제를 방출합니다.

대조군 세포 패치보다 PVEC 패치를 향한 더 높은 인터뉴런 이동은 PVEC의 화학 매력 단서에 대한 인터뉴런 반응을 확인합니다.

화학 인력 분석을 수행하려면 폴리-L-오르니틴 및 라미닌 코팅된 35mm 접시의 중앙에 3웰 배양 삽입물을 놓습니다. 접시를 거꾸로 뒤집고 팁이 매우 미세한 유성 마커를 사용하여 인서트의 중간 구획 주변에 경계를 표시합니다.

중간 구획에 있는 70마이크로리터의 뉴런 배지에 30,000개의 GABA성 중간 뉴런을 시드합니다. 그런 다음 10,000개의 뇌실주위 내피 세포와 10,000개의 대조군 내피 세포를 2개의 외부 구획에 있는 각각의 배지 70마이크로리터에 시드합니다.

접시의 코팅이 건조되는 것을 방지하기 위해 접시 측면을 따라 1밀리리터의 공동 배양 배지를 추가합니다. 48시간 후 삽입물을 제거하고 세포를 섭씨 37도 및 5% 이산화탄소에서 36시간 동안 배양합니다.

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마지막 업데이트: 29 8월 2026