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신경과학
0 조회수 • 2:47 분 • July 8th, 2025
신경 유도 배지에 인간 대뇌 오가노이드가 포함된 멀티웰 플레이트를 취하십시오.
오가노이드에는 줄기 세포, 방사형 신경교세포, 신경 전구 세포 또는 NPC, 발달 중인 뇌를 모방하는 로제트라고 하는 방사형 패턴으로 배열된 뉴런이 포함되어 있습니다.
배지를 제거하고 오가노이드를 완충액으로 세척합니다.
완충액에 현탁된 지카 바이러스를 테스트 웰에 추가하고 대조군 웰에만 완충액을 추가합니다.
인큐베이션하여 바이러스가 NPC의 수용체에 결합하여 내재화되도록 합니다.
내재화되지 않은 바이러스를 제거하기 위해 세척한 다음 신선한 신경 유도 배지를 추가하고 배양합니다.
내재화된 바이러스는 숙주 세포 기계를 사용하여 새로운 바이러스 입자를 형성합니다.
바이러스 증식은 세포사멸을 유도하는 세포 스트레스 반응을 유발하여 오가노이드 발달에 사용할 수 있는 NPC의 수를 감소시킵니다.
시간이 지남에 따라 감염된 오가노이드는 크기가 줄어들고 형태가 파괴되어 지카 바이러스에 감염된 인간의 비정상적인 뇌 발달을 반영합니다.
Earle의 1X 균형 소금 용액, 1X PBS 및 신경 유도 배지를 뜨거운 물 수조에서 섭씨 37도까지 가져옵니다. 다음으로, 1X Earle's 용액에서 알려진 농도의 지카 바이러스를 일반적으로 0.1에서 10 사이의 표적 감염 다중도로 희석합니다. P200 피펫을 사용하여 각 오가노이드 웰에서 모든 배지를 조심스럽게 제거한 다음 200마이크로리터의 따뜻한 1X PBS로 오가노이드를 빠르게 세척합니다.
각 웰에서 배지를 제거할 때 오가노이드를 만지거나 피펫으로 빨아들이지 않는 것이 중요합니다. 이것은 오가노이드에 돌이킬 수 없는 손상을 일으킬 수 있습니다. 이런 일이 발생하면 오가노이드를 폐기하는 것이 가장 좋습니다.
다음으로, 단일 채널 P200 피펫을 사용하여 각 오가노이드 웰에서 남은 모든 액체를 조심스럽게 제거합니다. 그런 다음 모의 감염을 위한 1x Earle's 용액 또는 지카 바이러스 용액 50마이크로리터를 각 웰에 빠르게 추가합니다. 각 오가노이드가 완전히 잠겨 있는지 확인하십시오. 완료되면 플레이트를 섭씨 37도 인큐베이터에 다시 2시간 동안 넣습니다.
바이러스 노출이 완료된 후. 오가노이드의 각 웰을 200마이크로리터의 PBS로 세척합니다. 오가노이드가 15초 동안 침전되도록 한 다음 단일 채널 P200 피펫을 사용하여 PBS를 제거합니다. 마지막으로 각 웰에 200마이크로리터의 신선한 신경 유도 배지를 추가하고 플레이트를 인큐베이터에 다시 넣습니다.