0 조회수 • 2:28 분 • July 8th, 2025
마취된 제브라피쉬 유충을 아가로스 젤을 안감 접시에 담고 뇌가 위를 향하도록 하여 주사합니다.
접시를 현미경으로 배치하여 발달 중인 뇌 내에서 액체로 채워진 공동인 뇌실을 시각화합니다.
면역 반응을 유발하는 박테리아 성분인 지질다당류(LPS) 용액이 들어 있는 미세 주사 바늘을 가져갑니다.
뉴런과 상주 면역 세포, 특히 미세아교세포가 포함된 영역인 뇌 tectum 위에 바늘을 배치합니다.
바늘로 뇌에 구멍을 뚫고 LPS 용액을 심실에 주입합니다.
주변 조직의 미세아교세포는 톨 유사 수용체를 통해 LPS에 결합합니다.
결합은 전염증성 사이토카인의 방출을 유발하여 호중구를 해당 부위로 모집하여 신경염증을 유발합니다.
호중구는 활성 산소종의 폭발을 생성하고 단백질 분해 효소를 방출하여 신경 세포 사멸을 초래합니다.
신경염증 유발 유충을 배양 배지로 옮겨 다운스트림 분석을 위해 유지합니다.
미세 주입 장치의 바늘 끝이 고배율의 유충과 동일한 시야에 있도록 미세 조작기를 설정합니다. 전자레인지를 사용하여 이중 증류수에 2% 아가로스 용액을 녹입니다. 녹인 아가로스를 플라스틱 접시에 붓습니다. 플라스틱 이송 피펫을 사용하여 마취된 유충을 2% 아가로스 코팅 플라스틱 접시의 중앙으로 운반합니다.
바늘에 접근할 수 있도록 뇌 쪽이 위로 향하도록 장착된 유충의 방향을 잡습니다. 현미경의 배율을 조정하여 제브라피쉬의 뇌실 구조가 시야에 명확하게 표시되도록 합니다. 바늘을 뇌 테두막 위에 조심스럽게 놓습니다. 70% 에탄올로 뇌 부위를 청소하고 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 바늘 끝으로 제브라피쉬 뇌의 피부를 천천히 뚫습니다.
풋 페달을 밟아 1나노리터의 1X PBS 또는 다른 농도의 지질다당류를 배출합니다. 주사 직후 유충을 깨끗한 E3 배지로 옮깁니다.