Modeling Reactive Oxygen Species-Induced Neuronal Death in Mouse Cerebellar Granule Neurons

마우스 원발성 소뇌 과립 뉴런의 배양을 취하십시오.

산소종 또는 ROS인 과산화수소를 포함하는 배지를 추가하고 잠시 배양합니다.

과산화수소는 세포 안으로 확산되어 반응성이 높은 자유 라디칼로 전환됩니다.

이러한 라디칼은 지질 과산화를 유도하여 세포막의 무결성을 손상시킵니다.

또한 라디칼은 세포 단백질에 산화 변형을 일으켜 기능을 손상시킵니다.

또한 DNA 절단을 유도하여 게놈 불안정성을 유발합니다.

라디칼은 또한 미토콘드리아를 포함한 세포내 소기관에 산화 손상을 일으킵니다.

이에 대한 반응으로 손상된 미토콘드리아는 세포사멸 프로테아제 활성화 인자-1에 결합하는 시토크롬 c를 방출하여 아포토솜 형성과 프로-카스파제-9의 활성 카스파제-9로의 전환을 유발합니다.

카스파제 9는 사형집행자 카스파아제를 활성화하여 세포 단백질을 더욱 절단하고 세포사멸성 신경 세포 사멸을 유도합니다.

배지를 신선하고 과산화수소가 없는 배지로 교체하여 신호 캐스케이드를 중지합니다.

ROS 유도 세포 사멸의 경우 뉴런을 75 내지 100마이크로몰의 과산화수소로 5분 동안 처리합니다. 5분 후 병렬 배양에서 조건화된 배지로 전환합니다.

과산화수소의 불안정성으로 인해 농도는 24시간 후 50%에서 70% 사이의 세포 사멸을 유도하는 수준으로 최적화되어야 합니다. 이 농도는 일반적으로 75에서 100마이크로몰 사이입니다.