EAE 마우스 모델에서 형광 염료를 사용한 혈액-뇌 장벽 파괴 결정

큰 덱스트란 사슬에 결합된 녹색 형광 염료를 포함하는 용액으로 시작합니다. 그런 다음 작은 덱스트란 사슬에 결합된 적색 염료 용액을 첨가합니다.

염료를 철저히 섞어 주사기에 넣으십시오.

이 염료 혼합물을 눈 뒤의 정맥인 안와후부비동을 통해 마취된 마우스에 정맥 주사합니다.

이 마우스는 실험적 자가면역 뇌척수염 또는 EAE를 앓고 있습니다.

이 상태에서 혈액-뇌 장벽은 틈이 있는 뇌 혈관의 내피 세포 사이의 약화된 긴밀한 접합부로 인해 교란됩니다.

마우스가 완전히 깨어나 운동성을 회복하여 염료가 순환할 수 있도록 합니다.

작은 덱스트란 사슬을 가진 빨간색 염료는 작은 틈을 통해 뇌 조직으로 쉽게 확산되는 반면, 큰 덱스트란 사슬에 결합된 녹색 염료는 손상이 심하면 확산됩니다.

뇌 조직에 있는 각 형광 염료의 양은 혈액-뇌 장벽 파괴의 정도와 관련이 있습니다.

덱스트란 원액을 제조하기 위해 3킬로달톤 덱스트란 텍사스 레드 10밀리그램을 500마이크로리터의 0.9% 염화나트륨 용액에 녹이고, 5밀리그램의 10킬로달톤 덱스트란 AlexaFluor 488을 250마이크로리터의 0.9% 염화나트륨 용액에 녹입니다.

덱스트란 작업 용액의 경우 주입 직전에 55마이크로리터의 10킬로달톤 덱스트란 AlexaFluor 488 원액을 밀봉 필름 조각에 피펫팅한 다음 55마이크로리터의 3킬로달톤 덱스트란 텍사스 레드 원액을 추가합니다. 100마이크로리터를 섞어 일회용 미세 주사기에 모으십시오.

그런 다음 마취된 마우스를 테이블 위의 측면 위치에 놓습니다. 마우스가 깨어나기 전에 100마이크로리터의 형광 추적자를 마우스에 정맥 주사합니다. 추적자를 15분 동안 순환시킵니다.