마우스 두개안면 조직의 면역염색

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신경과학

0 조회수 • 2:46 분 • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

신경능선 세포를 포함하는 고정된 마우스 배아 두개안면 조직의 냉동절개를 수행합니다.

비이온성 세제가 포함된 완충액으로 절편을 세척하여 포매 배지를 제거하고 멤브레인을 투과시켜 세포내 표적에 접근할 수 있도록 합니다.

비특이적 결합 부위를 포화시키기 위해 차단 용액을 첨가하십시오.

과도한 차단 용액을 제거합니다. 그런 다음 전사 인자 및 증식 마커와 같은 핵 항원을 표적으로 하는 1차 항체와 함께 배양합니다.

결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 완충액으로 세척합니다.

형광단 접합 2차 항체와 함께 배양하여 항원 결합 1차 항체에 결합합니다.

완충액을 사용하여 결합되지 않은 항체를 제거합니다.

형광 핵염료가 포함된 퇴색 방지 배지를 추가하고 커버슬립으로 덮습니다.

염료는 핵을 염색하고 퇴색 방지 매체는 이미징 중에 형광 신호를 보호합니다.

형광 현미경으로 절편을 이미지화하여 핵 마커 발현 및 국소화를 평가하여 신경능선 세포 증식 및 신호 전달 활동을 나타냅니다.

슬라이드를 0.1% PBST로 각각 5분 동안 세 번 헹구어 OCT를 씻어내고 절편을 투과시킵니다. 각 슬라이드에 200마이크로리터의 차단 용액을 첨가하고 실온에서 30분 동안 배양합니다. 그런 다음 슬라이드를 헹구지 않고 차단 용액을 제거합니다. 각 슬라이드에 차단 용액에 희석된 1차 항체 100마이크로리터를 첨가하고 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다.

실온에서 각각 10분 동안 PBS로 슬라이드를 세 번 헹굽니다. 차단 용액에 희석된 2차 항체 100마이크로리터를 넣고 빛으로부터 보호된 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 빛으로부터 보호된 상태에서 실온에서 각각 10분 동안 PBS로 세 번 헹구십시오. 슬라이드를 장착하려면 각 슬라이드에 DAPI가 포함된 퇴색 방지 매체 두 방울을 추가합니다. 커버슬립으로 덮고 이미징이 준비될 때까지 섭씨 4도에서 보관합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026