0 조회수 • 3:13 분 • July 8th, 2025
마취된 쥐부터 시작하여 면도한 머리를 소독하고 정위 고정 장치에 고정합니다.
정중선 절개를 하여 두개골을 노출시킵니다.
두개골에 두 위치를 표시하고 작은 구멍을 뚫습니다.
렌티바이러스 벡터 내에 생태성 HIV RNA를 포함하는 키메라 바이러스가 포함된 주사기를 정위 고정 장치에 부착합니다.
뇌의 면역 세포인 미세아교세포를 포함한 뇌 피질 세포를 표적으로 삼아 구멍에 바늘을 삽입합니다.
피질에 고르게 분포되도록 바이러스를 천천히 주입합니다.
주사 후 절개 부위를 봉합하고 해당 부위를 소독한 후 쥐가 회복될 수 있도록 합니다.
주입된 바이러스는 뇌 세포 수용체와 상호 작용하여 융합하여 HIV RNA를 세포질로 방출합니다.
RNA는 DNA로 역전사되어 세포의 DNA에 통합됩니다.
감염된 세포는 바이러스 성분을 발현하여 새로운 RNA와 단백질을 생성합니다.
이들은 새로운 바이러스로 조립되어 방출되어 뇌의 바이러스 부하를 증가시켜 활성 HIV 감염을 확립합니다.
EcoHIV EGFP 주사의 경우, 페달 반사에 반응하지 않는 것을 확인한 후 뇌 부위의 털을 깎아내고, 노출된 피부를 70% 에탄올과 클로르헥시딘계 스크럽으로 2회 살균합니다. 쥐를 정위 고정 장치에 엎드린 자세로 고정하고 두피 정중선을 따라 피부를 통해 5-6cm 절개합니다.
측면0.8mm에 드릴링 위치 1개, 1.2mm에서 브레그마에 표시하고 각 두개골 위치에 직경 0.4mm의 구멍을 뚫습니다. 적가된 EcoHIV 렌티바이러스 용액의 밀리리터당 10-6번째 형질도입 단위를 10마이크로리터 주사 주사기에 1.04배 10을 로드하고 주사기를 정위 고정 장치에 고정합니다.
바늘을 하나의 드릴링 구멍 표면 가까이로 이동하고 바늘을 구멍에 2.5mm 삽입합니다. 분당 0.2마이크로리터의 바이러스 비율로 1마이크로리터의 바이러스 용액을 주입합니다. 모든 바이러스가 주사되면 바늘을 주사 부위 내부에 5분 동안 두었다가 쥐 두개골 밖으로 나올 때까지 바늘을 천천히 집어넣습니다.
4-0 실크 실 봉합사로 피부 절개 부위를 봉합하고 용액을 70% 에탄올로 살균합니다. 그런 다음 누워있을 때까지 모니터링이 있는 가열 패드가 있는 회복실에 쥐를 놓습니다.