제브라피시 유충의 약물 유발 출혈 모델링

배아 배지에 수정된 제브라피쉬 배아가 들어 있는 배양 접시로 시작하십시오.

접시를 실체 현미경 아래에 놓고 해부 겸자를 사용하여 배아를 둘러싼 외막인 융모막을 제거합니다.

이를 통해 배아가 주변 배지에 노출될 수 있습니다.

이 융모막 제거된 배아를 뇌의 혈관 무결성을 유지하는 데 중요한 콜레스테롤 합성을 억제하는 약물이 포함된 배아 배지가 들어 있는 접시에 옮깁니다.

배아가 유충으로 자랄 때까지 제어된 온도에서 배양합니다.

시간이 지남에 따라 약물은 발달 중인 유충에 스며들어 콜레스테롤 합성을 억제합니다.

콜

레스테롤 결핍은 뇌의 혈관을 약화시켜 혈관이 파열되어 뇌로 혈액이 누출되어 출혈 반점이 발생합니다.

실체 현미경으로 유충을 관찰하십시오.

뚜렷한 붉은 반점이 있는 출혈성 유충을 출혈성이 없는 개체군과 분리합니다.

추가 연구를 위해 이 출혈성 유충을 새 접시로 옮깁니다.

수정 후 24시간 후, 명시야 입체 현미경 아래에서 날카로운 초박형 해부 겸자를 사용하여 아토르바스타틴 치료를 위해 배아의 융모막을 제거합니다. 그런 다음 E3 배아 배지 30밀리리터를 두 개의 깨끗한 페트리 접시에 첨가하는데, 하나는 치료용이고 다른 하나는 대조용입니다. 처리 접시에서 60마이크로리터의 배아수를 제거하고 60마이크로리터의 0.5밀리몰 아토르바스타틴을 추가하여 유충 출혈의 80%를 달성합니다.

파스퇴르 피펫을 사용하여 가능한 한 적은 물에 100개의 배아를 각 접시에 옮깁니다. 두 접시를 섭씨 28도에서 배양합니다. 수정 후 50시간 후 언제든지 현미경으로 파스퇴르 피펫을 사용하여 출혈된 물고기와 출혈하지 않은 개체군을 조심스럽게 분리하고 유충을 신선한 E3 배지가 들어 있는 새 접시로 옮깁니다.

출혈 양성 유충을 더 쉽게 분리하기 위해 색소가 없는 생선이나 적혈구에서 형광 단백질을 발현하는 생선을 사용할 수 있습니다.