JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 4:59 분 • July 8th, 2025
알츠하이머 환자에게서 채취한 뇌 조직의 피질 절편이 들어 있는 유리 슬라이드를 가져 가십시오. 조직에는 실질과 대뇌 모세혈관 내에 불용성 아밀로이드-베타 침착물이 포함되어 있습니다.
슬라이드를 희석된 알코올에 담가 지질과 염분을 제거합니다.
무수 알코올로 세척하여 조직을 탈수시킨 다음 고정액을 도포하여 조직 구조를 보존합니다.
슬라이드를 진공 청소기로 건조하여 수분을 제거합니다.
가습된 환경에서 포름산 증기로 처리하여 아밀로이드-베타 응집체를 더 작은 가용성 펩타이드로 분해합니다.
광학 스캐너를 사용하여 조직의 구조적 특징에 대한 이미지를 생성하여 이미징 질량 분석법의 데이터를 해석합니다.
시편 위에 매트릭스 용액을 분사합니다.
질량 분석기를 사용하여 매트릭스가 흡수하는 레이저를 적용하여 펩타이드를 이온화합니다. 그런 다음 검출기는 질량 대 전하 비율을 기반으로 식별합니다.
데이터를 분석하여 이미지를 생성하여 조직 실질과 대뇌 모세혈관에서 아밀로이드-베타 펩타이드의 분포를 밝
힙니다.조직 절편을 헹구려면 샘플을 40-100밀리리터의 70% 에탄올에 유리 염색병에 30초 동안 담가 내인성 지질과 무기염을 제거합니다. 텍스트 프로토콜에 나열된 세척 순서를 사용하여 샘플을 세척합니다. 그런 다음 샘플을 진공 상태에서 30분 동안 건조시킵니다.
이제 부검 뇌 조직에서 아밀로이드-베타 단백질의 더 나은 이온화를 위해 조직 절편을 포름산 증기로 처리합니다. 이렇게하려면 섭씨 60도의 오븐과 5 밀리리터의 100 % 포름산이 담긴 인큐베이션 유리 접시를 준비하십시오. 인큐베이션 유리 접시의 공기 습도를 포화 수준으로 유지하십시오.
포름산에 잠기지 않도록 하면서 조직 슬라이드를 배양 유리 접시에 넣고 6분 동안 처리합니다. 필름 스캐너, 젤 스캐너 또는 디지털 현미경을 사용하여 샘플의 광학 이미지를 촬영합니다. 실온에서 이 단계를 수행합니다.
샘플의 광학 이미지 정렬은 샘플 대상이 기기 내부에 배치될 때 필요합니다. 일반적으로 매트릭스 층 아래의 조직 섹션을 인식할 수 없습니다. 광학 이미지를 샘플과 연관시키려면 광학 이미지와 카메라 광학 장치의 매트릭스 레이어 아래에 모두 보이는 가이드 마크를 만듭니다. 가장 쉬운 방법은 광학 이미지를 촬영하기 전에 샘플 주변에 최소 3개의 수정액 마크를 발견하는 것입니다.
초음파 분무기로 매트릭스를 분사하려면 데시케이터에서 분무할 조직을 제거하고 챔버에 넣으십시오. 티슈가 센서 창을 덮고 있지 않은지 확인하십시오. 시작 버튼을 눌러 준비를 시작합니다. 일반적으로 준비 시간은 약 90분입니다.
준비는 매트릭스 층 두께와 습도의 모니터링을 통해 자동으로 조절됩니다. 또는 자동 분무기로 조직 표면에 매트릭스 용액을 분사하려면 분당 10PSI 및 0.15밀리리터로 설정된 용매 펌프 시스템을 사용하여 매트릭스 용액을 전달합니다.
가열된 시스 가스의 일정한 흐름이 매트릭스 용액 스프레이와 함께 전달됩니다. MALDI-IMS를 사용하여 높은 처리량 및 높은 공간 해상도 이미징 실험을 수행합니다. 질량 분석 측정의 경우 MALDI 제어 소프트웨어 및 데이터 분석 소프트웨어를 사용하여 조직 영역을 정의합니다.
질량 대 전하 비율 범위가 2,000 내지 20,000이고 공간 분해능이 20 및 100 미크론인 양의 선형 모드에서 스펙트럼을 획득합니다. 보정 표준물질을 만들려면 단백질 보정 표준물질에 펩타이드 보정 표준물질을 TA30 용액에 CHCA와 1:4 비율로 용해한 다음 10배 희석합니다.
1마이크로리터의 교정 표준물질을 슬라이드의 4개 다른 위치에 놓습니다. 분자 조직학 소프트웨어를 사용하여 여러 신호 이미지를 오버레이하여 동맥벽의 노인성 플라크에 공동 국소화되는 다양한 아밀로이드-베타 펩타이드와 같은 다양한 신호의 공간적 상관 관계를 찾습니다.