쥐 모델에서 뇌 미세출혈 감지

뇌 미세출혈(CMH)은 혈액-뇌 장벽 파괴로 인해 발생하는 신경염증성 뇌출혈로, 적혈구(RBC)가 뇌 조직으로 누출됩니다.

CMH를 검출하려면 CMH가 있는 쥐의 고정된 뇌 조직부터 시작합니다.

냉동 보호를 위해 조직을 자당에 담그십시오.

냉동 마이크로톰을 사용하여 조직을 절편하고 유리 슬라이드에 절편을 수집합니다.

잔

류 고정액을 제거하기 위해 세척하십시오.

음전하를 띤 DNA와 상호 작용하는 금속 양이온에 결합된 헤마톡실린 염료를 도포하여 핵을 적자색으로 염색합니다.

산성 알코올을 사용하여 과도한 염료를 제거한 다음 알칼리성 블루잉제를 발라 산성 환경을 중화하고 염료를 파란색 형태로 변환하여 대비를 향상시킵니다.

얼

룩 침투를 개선하기 위해 알코올로 조직을 씻은 다음 에오신을 도포하여 적혈구를 붉은 주황색으로 염색하고 조직 성분을 분홍색으로 염색합니다.

알코올 농도를 증가시켜 조직을 탈수하고 현미경 시각화를 위해 자일렌으로 제거합니다.

이미지를 캡처하여 빨간색-주황색의 누출된 적혈구를 감지하여 CMH를 확인합니다.

뇌를 분리한 후 PBS의 20% 자당에 최소 6시간 동안 또는 뇌가 튜브 바닥으로 가라앉을 때까지 담그십시오. 용액을 30% 자당으로 바꾸고 6시간 더 고정합니다.

마지막으로 극저온 조절기를 사용하여 10mm 두께의 뇌 조직 절편을 준비합니다. 슬라이드를 증류수로 세척하여 H&E 염색을 시작합니다. 그런 다음 헤마톡실린 용액에 8분 동안 담급니다. 염색 후 흐르는 수돗물로 5분 동안 씻으십시오. 1% 산성 알코올에서 30초 동안 구별합니다.

흐르는 수돗물에 1분간 씻은 후 0.2% 암모니아수 또는 포화 탄산리튬 용액에 30초에서 1분간 염색합니다. 그런 다음 흐르는 수돗물에 5분간 씻습니다. 에오신 용액으로 30초에서 1분 동안 대조염색합니다. 90% 알코올, 95% 알코올, 무수 알코올을 각각 0.5-2분 동안 탈수합니다.

탈수 후 자일렌에서 30초 동안 청소합니다. 장착 후 명시야 형광 현미경을 사용하여 H&E 염색을 분석합니다. CMH의 구성 요소인 혈관에서 방출되는 적혈구는 H&E 염색 시 적주황색으로 나타납니다.