0 조회수 • 3:33 분 • July 8th, 2025
실리콘 멤브레인에 부착된 멀티웰 바닥 없는 플레이트로 시작합니다. 멤브레인은 세포 접착을 촉진하기 위해 생체 고분자로 코팅되어 있습니다.
배지에 현탁된 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 뉴런 또는 hiPSCN(hiPSCN)을 웰에 도입합니다. 배지에는 세포 접착력을 향상시키기 위해 세포외 기질 또는 ECM 단백질이 보충됩니다.
플레이트를 배양하여 세포가 ECM 단백질과 생체 고분자에 부착되도록 하여 멤브레인 표면과의 균일한 상호 작용을 촉진합니다.
다음으로 부상 장치의 스테이지에 플레이트를 고정합니다.
장치를 사용하여 멤브레인에 압흔을 적용하여 뉴런에 제어된 기계적 응력을 생성합니다.
스트레스는 세포골격을 파괴하여 신경돌기라고 하는 세포 돌출부의 퇴화와 신경돌기를 따라 작은 부종을 형성합니다.
스트레스는 또한 세포막 무결성을 손상시켜 세포 사멸을 초래합니다.
신장 손상 표현형을 나타내는 hiPSCN은 이제 분석 준비가 되었습니다.
플레이트를 늘리려면 "위치 추적" 가상 계측기의 "파일 이름" 및 "파일 경로" 필드를 고유한 파일 이름으로 변경하고 실행 화살표를 클릭합니다. 이동 제어판 가상 계측기의 "부상" 및 "부상 지속 시간" 필드에서 들여쓰기의 깊이와 지속 시간을 설정합니다. 플레이트가 0 위치에 있는 상태에서 "Movement Control Panel" 가상 계측기를 실행하고 Injure를 클릭하여 플레이트를 들여씁니다.
상단을 클릭하여 스테이지를 위로 이동하고, 플레이트가 상단 위치에 있을 때 중지를 클릭하고, 도어를 열어 부상 장치를 비활성화합니다. 그런 다음 "Position Tracker" 가상 계측기에 제시된 스테이지의 변위 기록을 검사하여 지정된 최대 변위가 적용되었는지 확인하고 데이터를 적절한 스프레드시트 프로그램으로 내보냅니다.
플라즈마 처리 후 실리콘 멤브레인의 신축성을 평가하려면 플레이트를 부드러운 표면에 놓고 영구 마커 펜의 잉크로 스탬프의 작은 돌출부를 프라이밍합니다. 스탬프를 테스트할 첫 번째 웰에 삽입하고 탭하여 잉크가 잘 전사되도록 합니다. 모든 우물이 스탬프가 찍히면 렌즈를 가장 작은 번호의 F-스톱으로 설정하여 시야에 3x4 그리드에 12개의 압자를 포함하도록 부상 장치 위의 붐 스탠드에 고속 카메라를 놓습니다.
플레이트가 영점 위치에 있는 상태에서 카메라 소프트웨어에서 녹화 버튼을 한 번 클릭하여 "트리거 인"을 읽고 밝고 확산 축 조명을 켠 다음 방금 설명한 대로 플레이트를 들여쓰고 축 조명을 끕니다.
세포 배양을 손상시키려면 플라즈마 처리된 플레이트의 각 웰에 100마이크로리터의 라미닌 처리된 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 뉴런을 추가하고 세포를 세포 배양 인큐베이터에 넣기 전에 실온에서 15분 동안 세포가 플레이트 바닥에 부착되도록 합니다. 배양 2-3일 후, 플레이트를 손상 장치 스테이지에 고정하고 뚜껑의 위치를 조정하여 배양물을 주변 공기에 노출시키지 않고 플레이트를 고정합니다. 그런 다음 플레이트를 영점 위치에 두고 방금 설명한 대로 플레이트를 들여씁니다.