아밀로이드 펩타이드 주입을 통한 제브라피시 뇌의 알츠하이머병 모델 확립

응집되기 쉬운 특성을 가진 비정상적인 펩타이드인 합성 단량체 아밀로이드 펩타이드 용액으로 유리 주입 모세관을 채웁니다.

모세관을 미세 주입 홀더에 삽입합니다.

동시에 마취액이 들어 있는 페트리 접시에 제브라피시를 넣습니다.

물고기가 마취되면 집게로 옆으로 잡고 머리를 고정합니다.

두 측면 판의 접합부에서 물고기 두개골에 작은 절개를 하여 뉴런이 풍부한 전뇌에 접근합니다.

이제 절개 부위를 통해 모세혈관 바늘을 삽입하고 아밀로이드 펩타이드 용액을 전뇌에 주입합니다.

제브라피쉬를 순환수가 있는 회수 용기로 옮깁니다.

전뇌 내부에서는 아밀로이드 펩타이드가 뉴런 근처에 축적됩니다.

이 펩타이드는 자발적으로 잘못 접혀 베타 시트를 형성하고 뉴런 주위에 응집하여 독성 아밀로이드 플라크를 형성합니다.

이 플라크는 뉴런을 손상시키고 신호 전달을 손상시킵니다.

이것은 아밀로이드 플라크를 특징으로 하는 뇌 장애인 알츠하이머병의 제브라피쉬 모델을 확립합니다.

텍스트 프로토콜에 설명된 매개변수가 있는 바늘 풀러를 사용하여 유리 주입 모세관을 준비합니다. 압력 소스의 압력 설정을 25PSI로 조정합니다. 그런 다음 마이크로 인젝터에서 유지 압력을 20PSI, 배출 압력을 10PSI, 주기 값을 2.5, 게이팅 값을 100밀리초로 설정합니다. 다음으로 유리 모세관에 주입액을 넣습니다.

그런 다음 유리 모세관을 마이크로 주입 홀더에 삽입하고 주입 각도를 45도로 조정합니다. 마취액을 채운 새 페트리 접시에 물고기 한 마리를 넣습니다. 마취되면 집게로 물고기를 잡고 주사할 방향을 잡습니다. 30게이지 바늘 끝을 사용하여 두 개의 측면 플레이트가 만나는 시신경 관측 위의 두개골에 슬릿을 생성합니다. 바늘 끝만 사용하고 두개골을 통해 1mm 이상 관통하지 마십시오.

그런 다음 물고기를 계속 잡고 절개 부위를 통해 유리 모세관의 끝을 삽입합니다. 유리 모세관의 끝을 45도 각도로 종뇌 쪽으로 향하게 한 다음 1마이크로리터의 용액을 주입합니다. 물고기가 회복될 때까지 물고기를 운송 용기에 다시 넣으십시오. 그런 다음 최적의 수질을 보장하기 위해 정기적으로 순환하는 물고기 물에 용기에 연결하십시오.