Immunofluorescent staining of neuronal populations in the embryonic murine gastrointestinal tract(배아 쥐 위장관에서 신경 세포 집단의 면역형광 염색)

0 조회수2:58 • July 8th, 2025

원하는 발달 단계에서 고정된 형질전환 배아 마우스 위장관을 채취하십시오.

위장관의 장 신경계에는 장 뉴런과 콜린 아세틸트랜스퍼라제를 발현하는 콜린성 뉴런이 포함됩니다.

이러한 콜린성 뉴런은 또한 콜린 아세틸트랜스퍼라제 프로모터에 의해 구동되는 형광 단백질을 발현합니다.

관을 비이온성 세제 및 단백질과 함께 배양하여 세포를 투과화하고 비특이적 항체 결합을 방지합니다.

1차 항체로 교체하십시오. 항체가 각각 뉴런에서 표적 단백질에 결합하도록 배양합니다.

결합되지 않은 항체를 제거하고 완충액으로 세척합니다.

형광단 접합 2차 항체와 함께 배양하여 표적 단백질에 결합된 1차 항체에 특이적으로 결합합니다.

과도한 항체를 제거하고 완충액으로 세척합니다.

핵을 염색하기 위해 핵 염료가 포함된 마운팅 매체에 표지된 관을 담그십시오. 이제 커버슬립을 장착합니다.

공초점 현미경을 사용하여 위장관에서 콜린성 뉴런의 분포를 시각화하고 분석합니다.

위장관을 1x PBS, 3% 소 혈청 알부민, 0.1 Triton X-100으로 구성된 차단 용액이 들어 있는 0.2밀리리터 튜브에 넣고 실온에서 1시간 동안 흔듭니다. 블로킹 후 팁이 미세한 파스퇴르 피펫으로 블로킹 용액을 흡인하고 블로킹 용액에 희석된 1차 항체의 최적 희석액으로 교체합니다.

실온에서 4시간 동안 배양하거나 로킹 플랫폼에서 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다. 1차 항체 배양 후, 항체 용액을 흡인하고 위장관을 PBS에서 각각 5분 동안 3회 헹구고 나서 실온에서 흔들면서 1시간 동안 헹굽니다.

마지막 세척 후 PBS를 차단 용액에 희석한 형광단 접합 2차 항체로 교체하고 튜브를 어둠 속의 흔들림 플랫폼에 실온에서 4시간 동안 또는 섭씨 4도에서 밤새 놓습니다.

이전과 같이 위장관을 세척한 후 DAPI가 포함된 형광 마운팅 매체 몇 방울을 유리 슬라이드에 떨어뜨린 다음 위장관관을 마운팅 매체에 담그고 커버 유리를 추가합니다. 마지막으로 공초점 현미경을 사용하여 각 형광단의 이미지를 캡처한 다음 적절한 소프트웨어를 사용하여 컴퓨터 지원 이미지 분석을 수행합니다.

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마지막 업데이트: 29 8월 2026