신경퇴행성 질환 모델링을 위한 Rat substantia nigra에 바이러스 벡터 주입

마취된 쥐를 정위 프레임에 고정합니다.

두피를 소독하고 두개골 정중선을 절개하여 두개골을 노출시킵니다.

주사 부위를 결정하기 위해 두개골의 두 기준점인 브레그마와 람다를 식별합니다.

바이러스 벡터 현탁액이 들어 있는 미세 주입 주사기를 준비합니다.

바이러스 벡터는 신경퇴행성 질환에서 흑질 뉴런에서 잘못된 접힘 및 응집을 겪는 단백질인 알파-시누클레인을 암호화하는 전이유전자를 운반합니다.

미세 주입 펌프에 연결된 정위 기구에 주사기를 배치합니다.

주사 부위에 구멍을 뚫어 뇌 손상을 방지합니다.

바늘로 경막을 관통하고 멸균 조직으로 혈액을 청소하십시오.

미세 주입 바늘을 버 구멍을 통해 삽입하여 흑질에 도달합니다.

바이러스 현탁액을 천천히 주입하여 균일한 분포를 보장합니다.

역류를 방지하기 위해 잠시 멈춘 다음 천천히 바늘을 빼냅니다.

절개 부위를 봉합합니다.

이제 모델을 추가 분석할 준비가 되었습니다.

승인된 프로토콜에 따라 8주 된 암컷 Wistar 쥐를 적절하게 마취하는 것으로 시작합니다. 각 발을 쥐어짜고 금단 반사가 없음을 확인하여 마취의 수술 계획이 달성되었는지 확인하십시오. 다음으로, 마이크로트랜스폰더 임플란터를 사용하여 마이크로트랜스폰더를 쥐의 등에 놓습니다. 마이크로 트랜스폰더가 올바르게 배치되었는지, 판독값을 얻을 수 있는지 확인하십시오.

이제 쥐의 두피에 있는 털을 자르고 두피와 귀에 국소 마취제를 바르십시오. 쥐를 층류 후드로 옮기고 무균 기술을 사용하여 나머지 절차를 수행합니다. 이어바를 고정한 다음 입과 코 바를 고정하여 쥐를 정위 고정 프레임에 놓습니다. 체온이 떨어지지 않도록 쥐의 몸을 종이 담요로 덮으십시오. 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 안구 윤활제를 바르십시오.

다음으로 승인된 절차에 따라 두피를 소독합니다. 여기에는 1% 이소프로판올에 70% 요오드가 사용됩니다. 두피 정중선을 작게 절개한 후 두개골의 막을 부드럽게 긁어내고 식염수로 헹굽니다. 두개골을 건조시킨 후 브레그마와 람다가 명확하게 보이는지 확인하십시오.

이제 10마이크로리터, 30게이지 20mm 미세주입 주사기에 재조합 AAV를 채우고 정위 고정 기기에 연결된 전동 미세주입 펌프에 놓습니다.

흑질의 도파민성 뉴런의 특이적 형질도입을 위해, 재조합 AAV 벡터는 도파민성 뉴런을 형질도입하기 위한 높은 역가와 효율성 때문에 첫 번째 선택입니다.

AAV 한 방울을 방출하여 흐름을 테스트합니다. 방출된 AAV는 다가 세