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신경과학
0 조회수 • 2:18 분 • July 8th, 2025
관류된 마우스 뇌를 완충액에 넣으십시오.
뇌는 병원성 박테리아인 스트렙토마이신 내성 리스테리아 모노사이토제네스에 감염됩니다.
관류 단계는 뇌에서 혈액을 제거하여 박테리아 부하 측정이 조직 내 Listeria monocytogenes의 부하를 반영하도록 합니다.
다음으로, 멸균된 균질화기를 사용하여 뇌를 균질화하여 조직을 분해하고 박테리아를 방출합니다.
이제 완충액을 사용하여 뇌 균질액의 연속 희석액을 준비합니다.
항생제인 스트렙토마이신이 함유된 뇌 심장 주입 한천 플레이트에 이러한 희석액을 플레이트합니다.
플레이트를 배양합니다. 뇌심장 주입 한천은 리스테리아균 성장을 위한 영양분을 제공하는 반면, 스트렙토마이신은 내성 박테리아를 선택하여 스트렙토마이신 내성 리스테리아 콜로니만 형성할 수 있도록 합니다.
플레이트의 콜로니 수를 세어 뇌에서 생존 가능한 감염성 박테리아 부하의 척도인 콜로니 형성 단위를 결정합니다.
집게를 사용하여 두개골을 열어 뇌를 노출시키고 뇌 아래쪽과 두개골 기저부 사이에 주걱을 놓아 섭씨 4도의 PBS 5밀리리터가 들어 있는 15밀리리터 튜브에 뇌를 조심스럽게 옮깁니다.
생물 안전 캐비닛에 팁을 삽입하고 별도의 15밀리리터 원뿔형 튜브에 순차적으로 5% 표백제, 멸균수, 75% 에탄올 및 멸균수 용액에 조직 균질화기를 10초 동안 실행합니다. 팁이 완전히 멸균되면 감염된 뇌를 튜브에 균질화합니다.
멸균 PBS에서 각 장기 균질의 10배 연속 희석액을 준비하고 뇌 심장 주입 한천 플레이트에 희석액을 도금합니다. 그런 다음 균질염 희석 배양액을 섭씨 37도에서 밤새 배양하고 각 플레이트의 콜로니 수를 계산하여 장기 또는 혈액 밀리리터당 총 박테리아 수를 결정합니다.