Detection of Orexin and Cannabinoid Receptor Co-localization in Diet-Induced Obese Zebrafish(다이어트 유도 비만 제브라피시에서 Orexin and Cannabinoid Receptor Co-localization in Diet-Induced Obese Zebrafish)

JoVE Encyclopedia of Experiments

신경과학

0 조회수 • 2:31 분 • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

제브라피쉬의 뇌에서 뉴런은 신진대사를 조절하는 오렉신과 칸나비노이드 수용체를 발현합니다.

식이 유발 비만(DIO) 제브라피쉬에서 이러한 수용체는 점점 더 공국소화되어 헤테로오머를 형성하여 다운스트림 신호 전달을 변경하고 대사 조절에 영향을 미칩니다.

대조군과 DIO 제브라피쉬 모두에서 뇌 조직의 냉동 절편을 취합니다. 포매 배지를 제거하기 위해 완충액으로 절편을 세척합니다.

투과화 차단 완충액으로 처리하여 세포막을 투과화하고 비특이적 결합 부위를 마스킹합니다. 과도한 완충액을 제거하기 위해 세척하십시오.

수용체를 표적으로 하는 1차 항체 칵테일과 함께 배양합니다. 결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 세척하십시오.

1차 항체에 결합하는 다른 형광단 표지 2차 항체와 함께 배양합니다. 결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 세척하십시오.

형광 DNA 결합 염료를 첨가하여 핵을 표지합니다. 그런 다음 장착 매체를 도포하고 커버슬립으로 섹션을 밀봉합니다.

공초점 현미경을 사용하여 항체 형광을 검출합니다. 대조군에 비해 DIO 제브라피쉬에서 항체의 공동 국소화 증가는 더 높은 수용체 이종 질화를 나타냅니다.

먼저 0.1몰 인산염 완충액으로 각각 5분 동안 절편을 세 번 헹구습니다. 1차 항체 혼합물을 루테튬 PBT에 첨가하고 실온에서 습한 상자에서 절편을 밤새 배양합니다. 다음날, 0.1몰 인산염 완충액으로 각각 5분 동안 절편을 세 번 헹구십시오. PBT로 희석된 2차 항체의 적절한 혼합물에서 실온에서 2시간 동안 절편을 배양합니다.

0.1몰 인산염 완충액으로 각각 5분 동안 절편을 세 번 헹구십시오. 1.5마이크로리터의 DAPI를 3밀리리터의 인산염 완충액에 녹여 핵염료 DAPI를 준비합니다. 염료의 절편을 대조염색한 다음 마운팅 매체를 사용하여 슬라이드를 커버슬립하여 조직을 안정화하고 장기간 사용할 수 있도록 염색합니다. 형광 샘플은 섭씨 4도의 어둠 속에 보관할 수 있습니다.

09:10

설치류에서 다이어트 유발 비만 모델링을위한 신뢰할 수있는 방법으로 맛있는 서양식 카페테리아 다이어트

관련 동영상

0 조회수

08:02

면역 형광을 사용하여 TNBS 유도 크론 병을 가진 마우스의 결장에서 에스트로겐 수용체의 가시화

관련 동영상

0 조회수

06:28

운동 노력을 극대화하고 쥐의 생리적 변화를 유도하기 위한 만성 고강도 인터벌 트레이닝 및 식이 유도 비만 모델

관련 동영상

0 조회수

05:41

Zebrafish 태아의 대사 프로필 분석

관련 동영상

0 조회수

10:53

Zebrafish 애벌레의 Microgavage

관련 동영상

0 조회수

10:52

여러 제브라 피쉬에의 약국 (FDA)의 새로운 방법 ( 다니오의 레 리오 (rerio))와 철수의 정량화

관련 동영상

0 조회수

12:19

저렴하고 간편한 구축 Zebrafish의 시설의 건설

관련 동영상

0 조회수

08:35

높은 처리량 다니오 레 리오 (rerio) 에너지 지출 분석

관련 동영상

0 조회수

08:07

흰쥐의 나이브 설탕과 지방 섭취에 따라 변연계와 Mesocortical 도파민 보상 사이트에서 C-에 Fos 활성화의 동시 검출

관련 동영상

0 조회수

08:39

Zebrafish의 배아에서 내인성 수용체의 친화력 레이블 검출

관련 동영상

0 조회수

마지막 업데이트: 15 8월 2026