허혈성 마우스 뇌 조직에서 세포 현탁액 얻기

0 조회수3:47 • July 8th, 2025

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뇌세포와 침윤된 면역세포를 함유한 관류된 허혈성 마우스 뇌조직을 섭취하십시오.

스트레이너에 티슈를 다지고 완충액으로 헹굽니다.

여과액을 원심분리하고 상층액을 버립니다.

펠릿을 소화 효소 용액에 재현탁하고 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.

소화 효소가 세포외 기질을 분해하여 세포를 느슨하게 하도록 배양합니다.

현탁액을 여과하고 DNase가 함유된 완충액으로 헹구어 오염된 DNA를 제거합니다.

다음으로 DNase가 없는 완충액으로 세척합니다.

여과액을 원심분리하고 상층액을 버립니다.

밀도 구배 배지에 세포를 재현탁합니다. 그런 다음 내용물을 새 튜브에 옮기고 혼합합니다. 원심분리기로 성분을 밀도별로 분리합니다.

미엘린과 파편이 포함된 상청액을 제거합니다.

DNase가 없는 완충액에 펠릿을 재현탁합니다. 새 튜브로 옮기고 다시 원심분리합니다.

밀도 구배 배지를 충분히 제거하기 위해 상층액을 버립니다.

마지막으로, 추가 분석을 위해 세포를 완충액에 재현탁합니다.

5밀리리터 주사기의 플런저 끝을 사용하여 100미크론 세포 여과기를 통해 뇌 조직 조각을 으깨고 칼슘과 마그네슘이 함유된 얼음처럼 차가운 HBSS로 여과기를 지속적으로 헹굽니다. 그런 다음 균질화된 조직을 얼음 위에 놓습니다.

모든 샘플이 처리되면 세포 현탁액을 회전시킵니다. 그리고 상청액을 조심스럽게 버리십시오. 펠릿을 1밀리리터의 분해 완충액에 재현탁합니다. 그런 다음 세포 현탁액을 2밀리리터 튜브로 옮깁니다.

그리고 섭씨 37도에서 천천히 연속적으로 회전하여 세포를 배양합니다. 1시간 후, 70미크론 세포 여과기를 통해 세포 현탁액을 체질합니다. 그리고 DNase가 함유된 세척 완충액 3밀리리터로 필터를 철저히 헹굽니다. 그런 다음 15밀리리터의 DNase가 없는 세척 완충액으로 스트레이너를 세척합니다. 세포를 회전시키고 상청액을 버립니다.

세포 파편과 미엘린을 제거하려면 실온 25% 밀도 구배 배지 5밀리리터에 세포를 재현탁하고 세포 현탁액을 15밀리리터 튜브로 옮깁니다. 세포와 그라디언트를 반복적으로 부드럽게 피펫팅하여 완전히 혼합합니다. 그런 다음 세포 용액을 회전시킵니다.

분리가 끝나면 펠릿을 방해하지 않고 미엘린 코트와 상청액을 조심스럽게 흡인합니다. 그리고 DNase가 없는 세척 완충액 10밀리리터에 세포를 재현탁합니다. 세포를 15밀리리터 튜브로 옮기고 다시 회전시켜 펠릿을 100마이크로리터의 냉세척 완충액에 재현탁합니다.

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