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신경과학
0 조회수 • 2:04 분 • July 8th, 2025
노화 단계의 신경교 세포와 뉴런을 포함하는 피질 오가노이드의 얇은 부분이 포함된 슬라이드로 시작합니다.
세포 기능이 저하되는 노화 상태의 노화 뉴런에는 높은 수준의 베타-갈락토시다아제가 포함되어 있습니다.
절편은 세포 구조를 안정화하기 위한 고정제와 막을 투과화하기 위한 투과제로 전처리됩니다.
슬라이드를 염색 용기에 넣고 완충액으로 세척하여 용액 흔적을 제거합니다.
베타-갈락토시다제 효소용 기질을 포함하는 용액으로 슬라이드를 염색하고 배양합니다.
기질은 세포로 들어가 베타-갈락토시다아제가 기질을 절단하여 노화된 뉴런에 더 많이 축적되는 파란색 생성물을 생성합니다.
섹션을 반복적으로 세척하십시오.
퇴색 방지 마운팅제를 추가하고 응고시켜 스테인된 부분의 무결성을 보장합니다.
현미경으로 슬라이드를 관찰하십시오. 강렬한 파란색 제품이 있는 영역은 오가노이드 내의 노화된 뉴런을 나타냅니다.
오가노이드를 냉동 절편한 후, 슬라이드를 뚜껑이 있는 슬라이드 스탠딩 용기에 옮겨 여분의 마운팅 용액을 제거하고 절편된 오가노이드 조직을 실온에서 10분 동안 PBS로 3회 세척합니다. 그런 다음 슬라이드를 새로 만든 베타-갈락토시다제 염색 용액과 함께 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다. 염색된 조직을 실온에서 각각 10분 동안 PBS로 3회 세척하여 베타-갈락토시다제 용액을 제거합니다.
이제 세척된 조직을 유리 퇴색 방지 마운팅제로 마운트하고 현미경으로 보기 전에 실온에서 30분 동안 마운트 용액을 응고시킵니다.