0 조회수 • 3:02 분 • July 8th, 2025
노출된 단백질 항원과 비활성화된 내인성 과산화효소가 있는 고정된 인간 직장 흡입 생검 절편을 채취합니다.
비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 차단 용액을 첨가하십시오.
차단 용액을 히르슈스프룽병의 마커인 표적 신경교세포 단백질인 S-100에 결합하는 1차 항체로 교체합니다.
결합되지 않은 항체를 제거하고 과산화효소 중합체와 함께 배양하여 신호를 증폭합니다.
과도한 폴리머를 제거하기 위해 세척하십시오. 효소 중합체 및 1차 항체에 결합하는 2차 항체를 추가합니다.
결합되지 않은 항체를 제거하고 발색 기질을 추가합니다.
과산화효소는 기질과 반응하여 유색 침전물을 형성합니다.
과도한 침전물을 제거하기 위해 헹굽니다.
핵을 염색하기 위해 염료를 첨가하십시오.
과도한 염료를 제거하기 위해 산-에탄올 용액으로 세척하십시오.
다음으로, 농도를 증가시키는 에탄올과 자일렌을 사용하여 절편을 탈수합니다.
마지막으로, 마운트하고 현미경으로 관찰하여 표적 단백질의 존재를 나타내는 염색을 시각화합니다.
과잉 소 혈청 알부민을 버리고 밤새 섭씨 4도에서 50마이크로리터의 관심 1차 항체로 세포를 표지합니다. 다음날 아침, PBS에서 3분 동안 세 번 세척하여 슬라이드를 헹구고 각 슬라이드에 50마이크로리터의 폴리머 강화제를 추가합니다. 섭씨 37도에서 20분 후, 슬라이드를 PBS로 3회 세척하고 각 조직 절편에 50마이크로리터의 2차 항체 B를 추가합니다.
섭씨 37도에서 30분 후, PBS에서 5분 동안 세 번 세척하여 절편을 헹구고 각 슬라이드에 새로 준비된 DAB 작업 용액 한 방울을 추가합니다. 광학 현미경으로 적절한 수준의 갈색 염색이 검출되면 슬라이드를 PBS에서 5분 동안 헹구고 헤마톡실린 1방울로 핵을 1분 동안 대조염색합니다.
약 30-40초 동안 물줄임으로 여분의 얼룩을 제거한 다음 신선한 PBS로 25-30초 동안 세척합니다. 1% 염산 에탄올에서 10초 동안 조직을 구별한 후 1분 동안 PBS 세척합니다.
수화의 역순으로 5분 동안 담그고 슬라이드를 5분 동안 자일렌 교체에 두 번 노출시킵니다. 그런 다음 초청정 마운팅을 사용하여 커버슬립을 장착하고 슬라이드를 건조시킨 후 광학 현미경으로 시각화합니다.
본 논문은 히르슈슈프룽병(Hirschsprung's disease)과 관련된 마커인 S-100 단백질을 검출하기 위한 인간 직장 생검 절편의 면역조직화학 염색 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 표적 단백질의 존재를 시각화하기 위해 블로킹, 항체 배양 및 시각화 기술을 포함한 여러 단계로 구성됩니다.
직장 흡입 생검 절편에서 S-100 단백질에 대한 면역조직화학 염색은 글리아 세포 존재 여부에 대한 강력한 정량적 판독값을 제공하며, 이는 히르슈스프룽병과 같은 장신경병증의 표적 검증을 직접적으로 뒷받침합니다. 이 워크플로우는 조직 샘플의 표준화되고 재현 가능한 평가를 가능하게 하여, 확신 있는 생물학적 위험 제거와 연구 간 비교 가능성을 촉진합니다. 이러한 검증된 마커의 통합은 신경위장관학 분야의 초기 진단 및 중개 연구 파이프라인을 강화합니다.
본 면역조직화학 프로토콜은 초기 발견부터 전임상 검증 단계까지의 과정에 적합하며, 인간 조직 샘플에서 표적 및 바이오마커를 확인하기 위한 표준화된 방법을 제공합니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026