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신경과학
0 조회수 • 3:14 분 • July 8th, 2025
마우스 뇌간의 양측에 위치한 청반좌 영역에는 노르에피네프린 생성 뉴런이 포함되어 있으며 뇌 전체의 다양한 영역을 조절합니다.
이러한 청반좌 영역을 검출하려면 고정된 냉동 보존된 마우스 뇌간 절편을 운반하는 유리 슬라이드로 시작합니다.
고정 흔적을 제거하기 위해 완충액으로 슬라이드를 세척하십시오.
세제가 포함된 완충액을 첨가하고 멤브레인을 투과화하기 위해 배양한 다음 세척합니다.
도파민을 신경 전달 물질인 노르에피네프린으로 전환시키는 도파민 β-하이드록실라제 효소에 특이적인 1차 항체를 도입합니다.
항체가 도파민 β-하이드록실라제와 상호 작용할 수 있도록 배양합니다.
결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 세척하십시오.
그런 다음 녹색 형광단 결합 2차 항체를 첨가하고 어두운 곳에서 배양합니다.
2차 항체는 1차 항체에 결합한 후 세척합니다.
뇌 부분에 마운팅 매체를 추가한 다음 뚜껑을 덮고 건조시킵니다.
형광 현미경으로 슬라이드를 관찰하십시오.
뇌 절편에서 표지된 노르에피네프린 생성 뉴런을 나타내는 녹색 형광은 청색 영역의 존재를 나타냅니다.
첫날에는 24웰 플레이트의 뇌 절편을 PBS에서 각각 5분 동안 3회 세척합니다. 그런 다음 세제와 함께 0.5% PBS를 첨가하고 섭씨 4도에서 24시간 동안 투과화합니다.
다음날 슬라이스를 0.5% PBSD로 각각 5분 동안 세 번 세척합니다. 그런 다음 1차 항체를 0.5% PBSD에 1 내지 500의 희석으로 첨가하고 섭씨 4도에서 18시간 동안 배양합니다.
3일째에는 0.5% PBSD로 각각 10분씩 슬라이스를 3회 세척합니다. 그런 다음 2차 항체를 0.5% PBSD에 1 내지 1,000의 희석액으로 첨가합니다. 플레이트를 알루미늄 호일로 싸서 섭씨 4도에서 16시간 동안 배양합니다.
배양 후, 슬라이스를 0.5% PBSD로 각각 5분 동안 3회 세척한 다음 PBS에서 5분 동안 세척합니다. DAPI 없이 하드 세트 마운팅 매체를 사용하여 섹션을 덮습니다. 유리 덮개로 덮고 실온에서 30분 동안 건조시킵니다. 그런 다음 적절한 형광 파장의 신호를 감지하는 설정이 있는 공초점 현미경을 사용하여 뇌 조각을 이미지화합니다.