0 조회수 • 3:23 분 • July 8th, 2025
각각 고유한 형광 염료로 염색된 교모세포종과 미세아교세포의 저온 현탁액을 차가운 폴리머 매트릭스 용액에 첨가하는 것부터 시작합니다.
저온 조건은 매트릭스의 조기 중합을 방지합니다.
다음으로, 혼합물을 배양 플레이트 내의 다공성 챔버 인서트로 옮깁니다.
매트릭스 중합을 허용하여 배양하여 세포를 포매하는 겔을 형성합니다.
무혈청 배지를 삽입물에 넣고 혈청 함유 성장 배지를 아래 웰에 추가한 다음 배양합니다.
혈청의 화학적 요인은 혈청이 풍부한 배지로의 세포 이동을 촉진합니다.
또한 미세아교세포는 교모세포종 세포와 상호 작용하는 신호 분자를 분비합니다.
이것은 다공성 삽입물의 밑면으로의 교모세포종 세포 이동을 강화하며, 이는 종양에서 주변 조직으로의 이동과 유사합니다.
챔버 상단에서 셀을 제거합니다.
이제 나머지 세포를 고정제로 고정하고 완충액으로 세척합니다. 세포의 뚜렷한 형광은 세포 이동을 추적하는 데 도움이 됩니다.
매트릭스 혼합물을 섭씨 4도에서 밤새 해동합니다. 다음으로, 얼음 위의 적절한 배지에 10mg/ml 농도의 매트릭스를 준비합니다. 그런 다음 이전에 그림과 같이 매트릭스에 현탁하기 위해 표지된 세포를 수확합니다. 그런 다음 150마이크로리터 부피의 다섯 번째 GL261 세포에 1.5배 10배, 50마이크로리터의 네 번째 미세아교세포에 5배 10을 1.5밀리리터 미세분리기 튜브에 피펫팅합니다.
200마이크로리터 부피의 다섯 번째 GL261 세포에 200 번 10을 별도의 1.5밀리리터 미세분리기 튜브에 추가합니다. 세포를 미세분리기에서 120배g으로 5분 동안 회전시킵니다. 그런 다음 얼음 위에 200마이크로리터의 차가운 매트릭스에 세포를 재현탁합니다.
이 단계에서는 후드에 얼음 트레이를 준비하는 것이 중요합니다. 냉장고의 얼음 끝에 튜브를 보관하십시오. 성숙한 젤이 조기에 중합되는 것을 방지하기 위해 모든 것이 냉각되었는지 확인하십시오.
재현탁 후, 50 마이크로리터 부피의 50,000 세포를 8 미크론 기공 크기 챔버 인서트의 상단 구획 중앙에 도금합니다. 그런 다음 섭씨 37도에서 30분 동안 배양하여 중합이 일어나도록 합니다. 30분 후, 200마이크로리터의 무혈청 배지를 상부 챔버에 추가하고 700마이크로리터의 세포 성장 배지를 함유한 혈청을 하부 웰에 추가합니다.
48시간 동안 배양한 후, 부드럽게 흡인하여 챔버의 상단 부분에서 세포를 제거합니다. 이전과 같이 챔버를 고정하고 세포를 이미징하기 전에 고정액을 500마이크로리터의 1X PBS로 교체합니다.
본 논문은 폴리머 매트릭스를 이용하여 제어된 환경에서 교모세포종 세포의 이동을 연구하는 방법을 설명합니다. 이 접근 방식은 교모세포종 세포와 미세아교세포를 공동 배양하여 이들의 상호작용과 이동 패턴을 관찰하는 것을 포함합니다.
매트릭스 기반의 미세아교세포 공배양 시스템을 이용한 교모세포종 침습 모델링은 발굴 단계에서 종양-미세환경 상호작용에 대한 기전적 리스크 제거를 가능하게 합니다. 이러한 접근 방식은 질환 관련 세포 이동을 재현함으로써 타겟 검증에 대한 예측 신뢰도를 제공하고 중개 연구의 연속성을 지원합니다. 이 시스템은 종양 진행의 미세환경적 동인을 규명함으로써 초기 포트폴리오 결정에 유용한 정보를 제공하도록 설계되었습니다.
이 매트릭스 기반의 공동 배양 모델은 종양 침습에 미치는 미세환경의 영향에 대해 가설 기반 테스트를 가능하게 함으로써, 발견 단계부터 전임상 단계까지의 연속 과정에 통합됩니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026