태아 신경 줄기 세포의 지카 바이러스 감염

병원

성 바이러스인 지카 바이러스의 현탁액을 섭취하여 원하는 감염 다중성, 바이러스 입자와 세포의 비율을 갖습니다.

바이러스 현탁액을 인간 태아 뇌 신경 줄기 세포와 혼합합니다.

혼합물을 배양하여 바이러스가 세포의 수용체에 결합하도록 하여 바이러스 엔도사이토시스를 촉진합니다.

다음으로, 혼합물을 원심분리하고 내재화되지 않은 바이러스 입자가 포함된 상청액을 버립니다.

바이러스에 감염된 세포를 배지에 재현탁하고 세포외 기질 단백질로 코팅된 멀티웰 플레이트에 시딩하여 세포 접착을 허용합니다.

플레이트를 배양합니다.

내재화된 지카 바이러스는 숙주 세포 기계를 활용하여 새로운 바이러스 입자를 생성합니다.

바이러스 복제는 세포 형태를 크게 변화시켜 세포 손상을 일으키고 인접 세포로의 감염 확산을 촉진합니다.

지카 바이러스에 감염된 세포는 추가 분석에 사용될 수 있습니다.

펠

릿을 ZIKV 스톡에 1에서 10 사이의 감염 다중도 또는 MOI로 재현탁합니다. ZIKV 용액의 부피는 0.5밀리리터를 초과해서는 안 됩니다. 샘플을 섭씨 37도에서 1시간 동안 배양합니다. 그 후, 튜브를 2-3회 뒤집고 혼합물을 실온에서 216배 g으로 5분 동안 원심분리하여 세포 펠릿을 얻습니다.

흡인으로 상청액을 제거합니다. 그런 다음 DPBS로 세포를 재현탁하여 헹굽니다. 다음으로, 혼합물을 216배 g으로 5분 동안 원심분리하고 흡인하여 상청액을 제거합니다. 적절한 배지 12밀리리터로 세포를 재현탁합니다. 그런 다음 감염된 세포 500마이크로리터를 24웰 플레이트에 로드합니다.