신경 펩티드 수용체 작용제를 이용한 등쪽 뿌리 신경절 감각 뉴런의 자극

형질감염된 쥐 후근 신경절 감각 뉴런이 포함된 멀티웰 플레이트를 가져 와십시오.

테스트 웰 뉴런은 감소된 신경펩티드 수용체 발현을 나타내는 반면, 컨트롤 웰 뉴런은 생리학적 수준의 신경펩티드 수용체 발현을 나타냅니다.

정확한 자극 반응을 위해 통제된 환경을 제공하기 위해 배지를 무혈청 배지로 교체하십시오.

신경펩티드 수용체 작용제를 웰에 추가하고 혼합합니다. 플레이트를 배양합니다.

대조군 웰에서 신경펩티드 수용체 작용제는 표적 수용체에 결합하여 신경 전달 물질을 방출하는 세포 내 신호 전달 캐스케이드를 유발합니다.

그러나 테스트 웰에서는 신경펩티드 수용체 발현이 감소하여 작용제 결합이 제한되어 대조군에 비해 신경 전달 물질 방출이 감소합니다.

배양 후 우물과 원심분리기에서 배지를 수집합니다.

상청액을 튜브로 옮기고 적절한 면역분석을 사용하여 신경 전달 물질 수준을 측정합니다. 대조군 샘플은 신경 수용체 작용제 자극 후 테스트 샘플보다 더 높은 신경 전달 물질 방출을 나타냅니다.

6일째, 도금 후 및 siRNA 형질감염 후 72시간, 배양 배지를 200마이크로리터의 무혈청 배지로 변경합니다. 30분 동안 배양한 후, 자극 화학 물질 1마이크로리터를 첨가하고 피펫팅으로 부드럽게 혼합합니다. 필요한 시간 동안 배양한 후, 배양접시에서 배양액을 채취하고, 5,000배g에서 섭씨 4도에서 5분간 원심분리하여 부유 불순물을 제거한다. 원심분리에서 상청액을 수집하고 필요에 따라 인산염 완충 식염수로 희석합니다.