0 조회수 • 3:15 분 • July 8th, 2025
중대뇌동맥 폐색을 당하여 우뇌 반구로의 혈류를 제한하는 쥐를 예로 들어 보겠습니다.
혈액 공급 감소는 뇌세포의 산소를 빼앗고 수분 조절을 방해하며 세포 부종이나 부종을 유발하고 혈액-뇌 장벽 파괴를 유발합니다.
손상된 세포는 결국 죽어 경색 영역을 형성합니다.
쥐의 꼬리 정맥에 파란색 염료를 주입하여 BBB 파괴를 감지합니다.
뇌를 수확하여 면도날로 자르고 산화환원 염료 용액에 배양합니다.
살아있는 세포에서 염료는 미토콘드리아 탈수소효소와 반응하여 환원을 거쳐 생존 가능한 조직을 붉게 변합니다.
탈수소효소 활성이 부족한 경색 부위는 흰색으로 남아 있습니다.
슬라이스를 스캔하여 고해상도 이미지를 얻습니다.
이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 파란색 필터를 적용하여 파란색 염료 색상을 제거하고 이미지를 그레이스케일로 변환합니다.
건강한 흑색 조직과 경색된 백색 조직을 구별하기 위해 임계값을 적용합니다.
경색 부위와 뇌 부종을 영향을 받지 않은 반대쪽 반구의 백분율로 계산합니다.
시작하려면 쥐의 뇌를 제거하고 2인치 스테인리스 스틸 코팅되지 않은 단일 모서리 면도날로 0.009mm 두께의 수평 부분을 자릅니다. 절편을 0.005% TTC에 넣고 섭씨 37도에서 30분 동안 배양합니다. 그런 다음 뇌 조직을 현미경 슬라이드 위에 놓고 1,600 x 1,600 DPI의 해상도로 6개의 뇌 슬라이스를 광학 스캔합니다. 사진 편집기를 사용하여 이미지에 파란색 필터를 추가합니다.
소프트웨어를 연 후 이미지, 조정 및 채널 믹서로 이동합니다. 출력 채널로 파란색을 선택하고 단색을 선택합니다. 그런 다음 [확인]을 클릭합니다. 이미지를 JPEG 파일 형식으로 저장합니다. ImageJ 버전 1.37의 다각형 선택 도구를 사용하여 6개의 뇌 슬라이스 각각의 각 반구를 선택하고 별도의 이미지 파일로 저장합니다.
경색 부피와 뇌 부종을 계산하려면 매크로를 사용하여 임계값에 따라 이미지의 픽셀을 흰색 또는 검은색으로 변환합니다. 그런 다음 모든 파일을 닫고 두 번째 매크로를 사용하여 흰색과 검은색 픽셀의 수를 비교하여 경색 부피와 뇌 부종을 결정합니다. 원시 데이터를 스프레드시트에 복사합니다. 경색 부피를 계산할 때 동측 및 반대측 대뇌 반구의 비율을 사용하여 조직 부종을 보정합니다. 뇌 부종 영역을 영향을 받지 않은 반대쪽 반구의 표준 영역의 백분율로 표현합니다.